抗非特异性蛋白吸附两性离子聚合物表面制备、优化及应用.pdf

摘要 蛋白质与表面相互作用是纳米技术、生物材料和生物技术中的基本问题。抗 非特异性蛋白吸附表面已经成为如医用植入物材料，药物传递以及生物传感器等 生物医学应用中的一个重要问题，但是目前能够满足实际需要的超低蛋白吸附材 料并不是很多。本文系统的研究了一系列两性离子聚合物表面如硫代甜菜碱丙烯 酸甲酯(SBMA)，羧基甜菜碱丙烯酰胺(CBAA)和羧基甜菜碱丙烯酸甲酯 (CBMA)，对表面进行了优化，其目的是探索一种对血清和血浆都能够实现“零” 吸附的表面，并进一步探索了其在生物传感器和癌症疾病诊断等领域的应用。 第一，通过原子转移自由基聚合反应(ATRP)得到了不同厚度的聚SBMA 表面，并系统研究了不同厚度的表面与蛋白吸附的关系。实验结果表明，研究的 所有聚合物表面都可以认为是超低的非特异性蛋白吸附表面。同时，对于复杂介 质如未稀释血清和血浆的研究发现当聚合物厚度过薄或者过厚时，都可以看到较 明显的蛋白吸附，只有当聚合物的厚度大约为62nm时，可以观察到最低的蛋白 吸附。 第二，研究了一种基于聚CBAA的表面平台，这个平台可以非常有效、灵 敏以及特异性的检测血浆中的特定蛋白，同时还能提供非常稳定的超低蛋白吸附 背景。抗体功能化之后的聚CBAA表面表现出对未稀释血浆有超低的蛋白吸附 性质，表面等离子共振传感器(SPR)测量其吸附量低于3ng／cm2。对未稀释血 浆中一种癌症生物标记物(ALcAM)的检测表明其具有很高的灵敏度和特异性。 同时，还研究了聚CBMA的金表面和二氧化硅表面的功能化。 第三，通过ATRP反应得到了不同厚度聚cBAA的表面，并且研究了这些 表面与未稀释的老化血清，血清和血浆等多种蛋白在不同温度下的吸附关系。实 验结果表明当聚CBAA表面的厚度为20nm左右时，不管在25。C还是37。C下， 表面对未稀释的老化血清、血清和血浆的蛋白吸附值都低于SPR的检测下限即 0．3ng／cm2。另外，功能化的实验结果表明聚CBAA表面在功能化之后能继续保 持其良好的抗非特异性蛋白吸附的特性，并且可以对血清中的ALCAM抗原可以 有效的进行检测。 第四，验证了一种适用于纳米颗粒的可功能化且超稳定的表面。结果表明聚 CBAA包覆的纳米颗粒具有与传统的包覆层如聚乙二醇相比更稳定的特性，尽管 聚乙二醇和甲基丙烯酸低聚乙二醇酯包覆的纳米颗粒在10％人血清中能稳定存 在，但其在未稀释的血清中不能保持稳定。另外，生物识别因素如ALCAM可以 通过氨基化学法非常简单且有效的连接到聚CBAA的表面。聚cBAA包覆的纳 米颗粒表面的配体密度可以通过调整抗原／抗体的浓度而很容易的被调控。 关键词：超低蛋白吸附材料非特异性蛋白吸附两性离子材料表面等离子共 振硫代甜菜碱羧基甜菜碱纳米金 ABSTRACT hasbeenacrucialissuef．or biomedical Nonspecificproteinadsorption many asmedical vehiclesandbiosensors．At applications，suchimplants，drugdelivery area limitednumberofea’ective biomaterialsaVailabIe present。therevery nonfoulin2 aS t0meetthe of materialssuch challengespracticalapplications．Here，zwitterionic sulfobetaine and methacrylate(SBMA)，carboxybetaineacrylamide(CBAA)