光对裙带菜排卵的干扰及单克隆扩增、育苗条件优化.pdfVIP

刘建新 中国科学院海洋研究所硕士论文 摘 要 为了进一步完善裙带菜单倍体克隆 (简称单克隆，以下 同)育苗技术，实现该 技术的产业化，本文对单克隆的快速扩增以及育苗条件进行了优化研究。获得如下结 果; 一、光对裙带菜排卵的干扰现象: 仁般附苗后;_:夭雌雄配子即己形成。接近成熟的卵囊细胞翘起，长度达到5。一55 tom，直径为 19-2011m，一刽曲大后即pi排卵。精寸A*Z明，颜色微绿。正 11:13 (L:D)的光周期下，排卵一般在黑暗开始后5分钟即己开始，5-15分钟后达到高峰。 排卵的过程只有几秒钟。卵排出后停留在卵囊开口处，仍与卵囊牢固相连。 虽然排卵过程只有几秒钟，一旦这个过程受到光的干扰，就会诱导卵脱离卵囊。 实验证实，5-6lxmolm一Zs，的微弱光强 (显微镜下镜检的光强)即能引起95% 的卵 从卵囊脱落。根据我们的观察，一旦卵己排出并与卵囊相连，将不再受光的干扰而脱 落。脱落的卵很快死亡分解。将配子已经形成但尚未释放的培养转移至连续光下以后， 卵仍能排放，但排出的卵大部分脱落 (75%)，进一步说明了光对排卵的干扰作用。 在育苗实践中，为了方便工作，育苗车间内在天黑后的2-3小时内仍有照明，而 在第二天早晨取样观察 就会谁皿许多空的卵囊。我们的实验证实了这是由于排卵过 程受到光的干扰引起的 因此夕在育苗实践中，为了提高出苗率，在出苗期间，天黑 后2-3小时内育苗车间内应避免照明，以降低光导卵的脱落。 二、单克隆快速扩增以及育苗条件的优化: (一)、单克隆快速扩增的优化。 (}验结果表明: 时 u.单克隆快速生长的适宜光照强度为80-12011molm-s-`。单克隆的培养密度宜 1 控制在1-10g/L。接种密度以lg/L为宜。 ， 2单克隆藻体内能贮藏氮，因此在单克隆快速扩增过程中，可采用间歇施肥法补 J . . 充氮源。实验证明，培养液中氨态氮的适宜浓度为20pmol/L，可维持单克隆 ， . 6天的生长之用 (单克隆培养密度-L/)0g.11 I 3实验证明，在65天内，“老水”对单克隆的生长没有明显的抑制作用。而且， J PES培养基除去氮的其它成分也可满足单克隆65天的生长需求。 月 月 4.单克隆快速生长的适宜温度为220Ce 目 . . . . 另外，单克隆密度与消光值之间存在着线形关系，可以通过测量消光值来计 . 也 算单克隆的培养密度和鲜重，以代替称量法测鲜重。 1 综上，可提出如下单克隆快速扩增的模式:温度为220C;初始光强控制在 80-12011molms ;单克隆的接种密度为 lg/L;PES培养基 (除去氮的成分) 刘建新 中国科学院海洋研究所硕士论文 可供单克隆65天的培养之用，在这65天内，每隔六天左右将初始氨态氮补充至 201imol/L:单克隆 密度控制在 1-10g/L;单克隆培养密度和鲜重可通过测 量消光值计算得到。 依以上模式，并及时进行扩养，单克隆的鲜重平均日增长率可达25%，以此增 长率计算，log单克隆经一个月培养后鲜重可达8070克，可培育苗帘2000多个， 实现海面养