牛卵泡卵母细胞体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的研究.pdfVIP

牛卵泡卵母细胞体外成熟、体外受精 及受精卵体外培养的研究 摘要 本研究利用屠宰黄牛卵巢，对卵巢表面2-8mm卵泡卵母细胞的体外成熟 (IVM)一体外受精 (IVF)一受精卵的体外发育(IVD)进行了系列研究，并探讨了其影响因素。怡果如下: 1.采用400泌并且不理盖石蜡油的U形培养皿培养卵母细胞及受精卵，卵母细胞的体外成熟 率、卵裂率及受精卵的桑框胚、囊胚发育率与经典的搜盖石蜡油的小体积微滴 (50川)培养卵母 细胞的相应指标间差异不显著，表明在培养环境相对稳定的情况下，可以采用较常规体积稍大的 U形皿 (不理盖石蜡油)作为培养卵母细胞和胚胎的介质，以简化胚胎体外生产的程序。 2..采用M-199与10%发情牛血清 (ECS)无激素培养牛卵泡卵母细胞，获得了较高的卵母细 胞体外成熟率 (80.67%),卵裂率 ((57.07/0)和桑囊率 ((30%)，进一步证明在成熟培养液中单独 添加10%ECS是可行的，适宜于在生产中推广应用。 3对冻精体外获能的精子处理方法上游法、Percoll法及直接离心洗涤法进行了比较实验，三种 方法处理冻精分别用于IVF后，受精卵卵裂率均无明显差异 (P0.05)，上游法处理组与Percoll 法处理组，Percoll法处理组与洗涤法处理组桑囊率差异均不显著 (分别为29.100/6,28.47%和 28.47%,22.41%%:P0.05)，但上游法处理组与洗涤法处理组桑囊率差异显著 (分别为29.10% 和22.41%,P0.05)，表明在考虑成本的商业化胚胎生产中，上游法更适于应用。 4.首次比较改良台氏液 (PERT-TALP)作为受精液时，6-8小时精卵分开与18-20小时精 卵分开对受精卵体外发育的影响效果，结果两个处理组间卵裂率、8一细胞发育率及桑囊率差异均 不显著 (P0.05)，表明6-8小时精卵分开不影响受精卵的体外发育，更有利于胚胎体外生产的 实际。 5尝试性的用人胚胎培养基IVC-ONEo(0-8细胞阶段)和QuinnsD3+HTF(8一细胞后发育 阶段)+10%ECS培养牛胚胎获得了与M-199培养基培养牛胚胎一样的效果 (牛培养墓处理组与 人培养基处理组8-细胞发育串和桑级率分别为60.63%,64.83%和26.600/e,32.760!0)。提示可以 通过研究人胚胎培养墓的组成及对胚胎的作用机理优化牛胚胎的体外培养体系。 6.建立了相对比较实用而且有效的牛卵泡卵母细胞 IVM-IVF-IVC程序:利用U形培养皿和 M-199+25mMHepes+l0/6DOECS高密度 ((50-60枚//4001)培养牛卵泡卵母细胞23h后，用改良 台氏液加6mg/mIBSA和5mm咖啡因及上游法洗涤精液、分离活精子及获能(另加1011g/ml肝 素);精卵在受精液中共同孵育6-8小时后转移至M-199+10%ECS+顺粒细胞单层或输卵管上皮 细胞单层中培养，直至发育到桑mffafffe少 关键词:卵泡卵母细胞 体外成热 体外受精 体外培养 牛 资几于卜勺、 StudiesontheIVM,IVFofFollicularOocytesand IVCofinvitroFertilizedEggsinBovine :MaYun Tutor:AssociatedProfessor ZanLinsen ProfessorDouZhongying KeylaboratoryofAnimalReproductiveEndocrinologyandEmbryoBiotechnologyof人护cultureMinistryof China.NorthwestScienceTechnologyUniversityofAgricultureForesty.Yangling.Shamed712100 Abstract Inthispaper,ca