生物素化衍生物的合成及其在游离甲状腺素放射免疫分析中的应用研究.pdfVIP

— 丝堕〕丝迭些丝全AA甚WVA甲状腺素放射免疫分析中的应用研究 生 生物素化衍生物的合成及其 在游离甲状腺素放射免疫分析中的应用研究 摘 要 么物素一亲合素系统作为分离系统应用于放射免疫分析，可以很好地提高 分离效果。目前，游离甲状腺素放免分析方法中最先进的标记抗体法中就采用 了该系夕乍为分离手段。为了成功开发出此类产品，获得好的经济效益和社会 效益,，1本文对半抗原几的生物素化、生物素化几抗体的制备及其在放免分析中 的应用进行了初步探讨。 本论文成功地合成了两种常用的生物素衍生物:生物素N-经基丁二酞亚 胺酷 (BNHS)和生物素 6-氨基己酸一N-经基丁二酞亚胺酷 (BCNHS)，其 质量与进口标准品相当。利用所合成的生物素化试剂，制备了生物素化的T,抗 体，同时对其生物素化过程中反应介质、时间、生物素化试剂的用t等因素对 生物素化效果的影响进行了研究 T4抗体的生物素化在OAMNaHCO,溶液的反 应介质中的生物素化效果较在 PB 介质中好。达到相同的结合效果，前者只需 h r 2 后者要24hr。生物素化试剂与抗体的摩尔比增加，生物素化程度随着增 加 240:1时结合率可达46 。应用固相.亲合素与所制备的生物素化T,抗体 制成固相抗体并应用于标记T,衍生物一步法放免药盒。进行了条件实验，选择 了合适的抗体包被条件和工作条件，绘制了标准曲线.卜 另一方面，应用生物素化试剂BNHS，合成了T的‘生物素化衍生物及其碘 生物素化衍生物的合成及其在游离甲状腺素放射免疫分析中的应用研究 一125标记物;利用HPLC色谱分析、碘标记T,生物素化衍生物检测其与固相 Avidin和几抗体的免疫结合性质，证明了其既能与固相亲合素特异结合又能与 T,抗体特异结合。拉用二种碘标记方法(抓胺一T法和Idogen法)标记T,生物 素化衍生物，结果表明氛胺一T法因为氧化能力过强在碘化过程中使生物素分 解，无法得到其标记物。Idogen法较温和，在碘化过程中能保持生物素的结构， 制得的标记物具有较好的亲合素免疫结合能力。应用于FT,RIA (液相法分离)， 结合率能达到36.21%，证明衍生物中毛部分保持了与抗体结合的免疫活性。 至此，本论文成功地合成了具有双重免疫活性的T,生物素化衍生物。但将该衍 生物应用于标记抗体法放免分析，却未能得到较好的结合效果，估ifl, 空间位阻等其他因素的影响，如何解决这一问题，还需进一步研究探讨 另外，本文也对采用多种其他路线合成T,生物素化衍生物进行了初步的研 究。Cp是山于时间、实验条件的限制，未能成功地合成出目标衍生物，但所作 的探讨于“以半“抗原的生物素化研究工”提供了aff‘的借鉴和”助。丫 l/ 妇 关键词:生物素一亲合素系统 游离甲状腺素 生物素化，生物素化T,抗体， 认 几的r化衍生物’ 生物素化衍生物的合成及其在游离甲状腺素放射免疫分析中的应用研究 TheSynthesisofBiotin andtheirApplicationsinFreeThyroxineRadioimmunoassay ABSTRACT Biotin-Avidinsystemisusedasseparationsystemtoimprovetheseparation efficientlyinRIA.Thelabeled immunoassayisthemostadvancedRIA methodofthemeasurementofrfeethyroxine，inwhichBiotin-Avidinsystemisalso applied.InordertodevelopthenewFT,RIA,thebiotinylated biotinylatedanti-T,antibodyweresynthesizedinthepaper.Ontheotherhand, researchesoftheir