BCL2NFКB血管紧张素ΙΙΙ受体在大鼠非酒精性脂肪肝病中作用及其机制研究.pdf

目 录 1 BCL-2,NF- КB,血管紧张素ΙΙ- Ι受体在大鼠非酒精性脂肪 肝病中的作用及其机制研究…………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………5 1.3 前言……………………………………………………………10 1.4 材料与方法……………………………………………………12 1.5 结果……………………………………………………………21 1.6 讨论……………………………………………………………36 1.7 结论……………………………………………………………46 1.8 参考文献………………………………………………………47 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………52 2 致谢……………………………………………………………53 3 NF- КB 、Bcl-2 在非酒精性肝病肝细胞凋亡作用中的研究进 展（综述）……………………………………………………54 2 BCL-2,NF- КB,血管紧张素ΙΙ- Ι受体在大鼠非酒精 性脂肪肝病中的作用及其机制研究 摘 要 目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)近年来发病率逐年增高,是一 种严重威胁着人类健康的常见疾病，是在患者无过量饮酒史的情况 下，发生的与酒精性肝病(ALD)相似的肝脏病理学变化，其病理生理 改变主要是肝细胞发生炎症、坏死和凋亡,病程逐渐向脂肪性肝炎、 肝纤维化，肝硬化发展。现有研究认为非酒精性肝病,是一种与遗传 基因易感性以及胰岛素抵抗密切相关的应激性代谢性肝损伤。本研究 通过建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型，随着其病变进展在不同时间 点观察肝细胞凋亡，炎症，纤维化，以及相关的蛋白BCL-2、NF-KB、 血管紧素Ⅱ-1 受体的表达情况，从而探讨以上三种相关蛋白在非酒 精性肝病中的作用及其机制，并研究通过抑制NF-KB 表达后，所致 的肝脏病理形态变化及 BCL-2,血管紧素ΙΙ-1 受体的表达改变情 况，为研究NAFLD 发病机制及治疗方案提供新的研究佐证。方法： 健康成年雄性 Spague-Dawlay(SD)大鼠42 只按随机表为三组3 组： 正常组18 只（普通饲料喂养），模型组18 只（高脂饮食喂养），干 预组6 只（高脂饮食饲养10 周后PDTC 腹腔注射4 周），分别于6,10,14 周末处死各组大鼠6 只，每组大鼠处死后以心脏采血，并测定各组大 鼠血脂和转氨酶值，取肝组织标本测定肝指数（处死大鼠开腹后迅速 取出肝脏，称肝湿重，（计算方法:肝湿质量/体质量×100%），固定 3 并切片后苏木精-伊红（HE ）染色观察肝组织病理改变（脂肪变，炎 症，纤维化等）；采用 TUNEL 法测肝细胞凋亡百分数法测肝细胞凋 亡百分数；免疫组织化学法检测Bcl-2 ，NF-KB 在肝组织中表达情况； RT-PCR 法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)检测肝脏 血管紧张素二-1 受体（AT1R）的表达。计量资料用均数±标准差（x±S） ¯ 表示，P ＜0.05 有统计学意义。不同时间段正常组与模型组组间比较， 模型组与正常组组间比较，14 周干预组，模型组，正常组三组比较 采用方差分析，并进行方差齐性检验，齐者采用单因素方差分析。结 果：进行实验的42 只大鼠全部存活，都进入结果进行分析。⑴随着 时间的延长，6 周末及 10 周末均成功构建非酒精性脂肪肝及非酒精 性肝炎模型，14 周末模型组出现 4 只大鼠肝纤维化，干预组出现 1 只大鼠纤维化。（2 ）6、10、14 周模型组大鼠在肝湿变数、血脂、血 清转氨酶水平等方面逐步增高，肝组织脂肪变、炎症程度逐渐加重， 后期出现纤维化表现；而干预组在上述方面亦有增高。（3 ）HE 染色 提示模型组6、10、14 周动物肝