熏蒸剂对土壤微生物群落多样性影响及其方法学研究.pdf

摘 要 熏蒸剂对土壤微生物群落多样性的影响及其方法学 研究 作者简介：马旭，男，1984 年 11 月生，师从成都理工大学安莲英教授，2010 年 06 月毕业于成都理工大学分析化学专业，获得理学硕士学位。 摘 要 本文以北京市通州区大棚蔬菜试验田土壤为材料，运用现代生物化学手段， 采用 BIOLOG 微平板与磷脂脂肪酸分析相结合的方法，探讨了熏蒸剂氯化苦和硫 酰氟对农田土壤微生物群落结构和功能多样性的影响，对群落系统受到熏蒸剂扰 动后的恢复能力进行了初步评价。本研究所获主要结论如下： 1.采用 BIOLOG 方法系统研究了熏蒸剂氯化苦施用对土壤微生物功能多样性 的影响以及氯化苦胁迫下土壤微生物功能恢复情况。研究结果表明，氯化苦处理 后，土壤微生物的丰富度、均匀性和多样性均受到一定程度地影响。第一次取样， 三个浓度氯化苦处理土壤的 McIntosh 指数与对照相比差异显著，分别降低 72.31%、95.73%、97.33%，表明物种均匀性受到不同程度地影响，并且随浓度递 增而加大；Simpson 指数分别降低 39.36%、45.93%、21.96%,说明氯化苦的添加 降低了土壤微生物种群的生物多样性；而从 Shannon 指数来看，800mg/kg 浓度 处理过的土壤微生物的该指数值与对照相比增加 6.66%，而 80mg/kg 浓度处理的 该指数值与对照相比无显著差异，表明随着施药浓度的增大开始出现一定的耐受 能力，生物量有所增大，丰富度指数有所增加。7d 后取样结果表明，随着时间 的推移，三指数都出现了波动，40mg/kg 浓度处理的土壤其 McIntosh 指数值下 降，但变化不显著，而80mg/kg 和 800mg/kg 处理土壤的 McIntosh 值有小幅度的 上升；高、中、低浓度处理土壤的 Simpson 多样性指数值均呈下降趋势，且减幅 不显著；而 Shannon 丰富度指数经浓度梯度处理后均下降，其幅度不明显。AWCD 值、Simpson 指数、McIntosh 指数和 Shannon 指数的变化能够较好的表征氯化苦 胁迫下土壤微生物的功能抗性。均一性指数 McIntosh 能有效地指示污染环境的 微生物学变化，在整个处理期间，该指数变化趋势与 AWCD 值变化值基本一致， 表明 AWCD 值和 McIntosh 指数的表征效果较好。 2.土壤微生物在原始状态下以糖类和氨基酸类为基础碳源进行代谢。氯化苦 施用初期，对土壤微生物群落利用碳源的能力产生抑制作用。随着土壤培养时间 的增加，土壤微生物逐渐适应了氯化苦，导致氯化苦对土壤微生物群落碳源利用 I 摘 要 能力的抑制程度减弱，土壤中优势种群大量繁殖，微生物对碳源的利用类型也逐 渐增多。培养后期，随着土壤中内源性碳源的消耗，土壤中微生物种群出现功能 性衰减，多样性降低，对 BIOLOG 中碳源的利用能力也减弱。80mg/kg 和 800mg/kg 氯化苦对氨基酸、羧酸、胺类碳源的利用影响较大。4 种样品中微生物生理代谢 活性和碳代谢类群变现出明显差异，形成各自独特的微生物类群。 3.在 BIOLOG 研究基础上，采用磷脂脂肪酸 (PLFAs)方法，对熏蒸剂氯化苦 和硫酰氟施用后土壤微生物群落结构变化进行了研究。研究发现，土壤中检测到 PLFAs 从 C13 到 C20 共计 16 种,包括饱和脂肪酸 (16:0,18:0,20:0)、支链脂肪酸 (i13:0,a14:0,i15:0,i16:0,a16:0,9Me18:0)、环丙烷脂肪酸(cy18:0)、单不饱 和脂肪酸 (16:1ω7c,18:1ω9c)和多不饱和脂肪酸 (18:2ω6,9、22：4、20:3)。 根据每种脂肪酸占总脂肪酸含量的百分数得出，偶数碳饱和脂肪酸的相对含量为 41.97%，是土壤中含量最丰富的脂肪酸种类，其次是单不饱和脂肪酸和支链脂肪 酸，相对含量分别为 29.18%和 13.22%。其中，饱和脂肪酸 16：0 和 18：0、单 不饱和脂肪酸 18：1ω9c 和 16：1ω7c、支链脂肪酸 a14:0 为优势脂肪酸。多不 饱和脂肪酸的相对含量较低，仅占到总 PLFA 的 9