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斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究 中文摘要 斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究 中文摘要 【目 的】 血小板在肿瘤血行转移的过程中发挥重要作用。有研究显示肿瘤细胞表面的整合 素（Integrin ）α2 、β1 参与了肿瘤细胞与血小板的粘附过程。有研究显示斑蝥素 （Cantharidin ）及其衍生物对包括乳腺癌在内的多种肿瘤具有抗肿瘤活性。目前尚不 清楚斑蝥素类药物是否能够影响肿瘤细胞与血小板的粘附过程。斑蝥素及其衍生物是 蛋白磷酸酶2A （Protein Phosphatase 2A，PP2A ）的抑制剂。PP2A 被抑制后，可导致 多个信号通路中的关键激酶被激活。本研究拟检测斑蝥素及其衍生物，去甲斑蝥素 （Norcantharidin ，NCTD ），对乳腺癌细胞株MCF-7 生长、转移等生物学行为的影响， 着重研究Cantharidin 及Norcantharidin 对乳腺癌细胞与血小板之间粘附能力的影响， 并探讨其信号转导机制。 【方 法】 通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT 法）检测 Cantharidin 和 Norcantharidin 对 MCF-7 细胞增殖能力的影响；通过平板克隆形成实验检测 Cantharidin 和 Norcantharidin 对MCF-7 细胞克隆形成能力的影响；通过流式细胞术 （Annexin-V/PI 双染法）检测Cantharidin 和Norcantharidin 对MCF-7 细胞的凋亡诱导作用；通过划 痕实验检测Cantharidin 和Norcantharidin 对MCF-7 细胞迁移能力的影响；通过MTT 法检测 Cantharidin 和Norcantharidin 对MCF-7 细胞粘附能力的影响；通过流式细胞 术检测MCF-7 细胞与CFDA-SE （Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester ）标 记的洗涤血小板的粘附能力；应用实时定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR ，real-time PCR ）检测Cantharidin 和Norcantharidin 对MCF-7 细胞中整合素α2、 β1 mRNA 表达的影响。通过流式细胞术检测Cantharidin 和Norcantharidin 对MCF-7 细胞表面整合素（Integrin ）α2 蛋白分布的影响。通过小干扰RNA （Small interfering RNA，siRNA）或信号通路抑制剂阻断激酶通路进行信号通路研究。 I 中文摘要 斑蝥素抑制乳腺癌细胞与血小板粘附的机制研究 【结 果】 1. Cantharidin 和Norcantharidin 抑制MCF-7 细胞增殖，呈剂量和时间依赖效应。 2. Cantharidin 和 Norcantharidin 抑制 MCF-7 细胞克隆形成，呈剂量依赖效应。3. Cantharidin 和Norcantharidin 诱导MCF-7 细胞凋亡，呈剂量依赖效应。4. Cantharidin 和 Norcantharidin 抑制 MCF-7 细胞粘附，呈剂量依赖效应。5. Cantharidin 和 Norcantharidin 抑制 MCF-7 细胞迁移，呈剂量和时间依赖效应。6. Cantharidin 和 Norcantharidin 抑制MCF-7 细胞整合素α2 mRNA 表达，而对整合素β1 mRNA 表达水 平无明显影响。7. Cantharidin 和Norcantharidin 下调MCF-7 细胞表面整合素α2 蛋 白水平。8. Cantharidin 和Norcantharidin 通过下调整合素α2 表达抑制MCF-7 细胞