HO1保护人血管内皮细胞抗凋亡作用研究.docVIP

ＨＯ－１ 对人血管内皮细胞抗细胞凋亡保护作用的研究　 摘　要　  血红素加氧酶  ＨＯ  是血红素代谢途径中的限速酶  催化血红素转  化成等分子量的胆绿素 ＣＯ 和游离铁 胆绿素再由胆绿素还原酶还原成 胆红素 其中 ＨＯ－１ 是血红素代谢中的限速酶 现在也有很多研究表明在 细胞受到外来的作用时能刺激它的表达从而起到保护细胞的作用 这种 保护作用的机理可能是因为血红素降解产物的作用 ＨＯ－１ 属诱导型 ＨＯ 它属于一种热休克蛋白或应激蛋白 对引起氧化应激和其它病理反应的 所有刺激物或化合物都十分敏感 包括底物血红素 血红蛋白 重金属  过氧化物  紫外线及缺氧等  分布于肝脏 脾脏 肾脏和心脏等组织  ＨＯ １ 通过氧化应激 而在细胞中大量表达 达到保护细胞  抗凋亡的  目的  　  本实验的目的是研究 ＨＯ－１ 在保护细胞凋亡中的作用 探讨其产生保 护作用的机理 实验中将克隆了 ＨＯ－１ 基因的质粒 ｐｃＤＮＡ３ＨＯ－１ 用 ＤＯＴＡＰ 包裹转入人血管内皮细胞 ＨＵＶＥＣ 中进行表达 质粒表达一段时间后采  用 ＴＮＦ  诱导细胞凋亡  以流式细胞仪测定细胞凋亡率  　  在质粒转染进细胞后 用细胞裂解液破碎细胞 　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 鉴定表达  量 件  通过设置质粒转染的时间梯度和浓度梯度 找出质粒表达的最佳条 再通过在各个条件下细胞凋亡率的对比 证明 ＨＯ－１ 抗凋亡的能力 I 在未用任何刺激剂的条件下 未转染进 ＨＯ－１ｃＤＮＡ 的细胞的凋亡率是转染 进的 ５－２３ 倍 采用用 Ｈｅｍｉｎ　和 ＳｎＰＰ 分别刺激细胞 促进和抑止 ＨＯ－１ 在细胞中的表达 实验结果显示经 Ｈｅｍｉｎ 处理过的细胞的凋亡率均在 ２０  以下  而 ＳｎＰＰ 处理过的细胞的凋亡率大幅的上升 最高可达到 ９５  以上  整个数据显示 ＨＯ－１ 的表达被抑止时细胞的凋亡率是 ＨＯ－１ 的表达  被诱导时的 ５ ２０ 倍左右 实验证明细胞的凋亡率与质粒的转染效率成 反比 ＨＯ－１ 对细胞有保护作用 可以抑制细胞凋亡 在临床上有广泛的  应用前景 　  　  关键词 血红素加氧酶 １ 肿瘤坏死因子 胞凋亡　 II  血红素 锡原卟啉 细 HEME OXYGENASE-1 INHIBITS APOPTOSIS IN HUVEC ABSTRACT Heme Oxygenase-1(HO-1) is the rate- limiting enzyme in the catabolism reaction of heme, which produces equimolar amounts of biliverdin, iron, and carbon mo noxide. HO-1 is a stress response protein, the induction of which is associated with protection against oxidative stress. The mechanism of protection is not completely elucidated, but most believe that one or more of catalytic by-products provide antioxidant functions either directly or indirectly. HO-1 is involved in the oxidative response, being highly induced in such conditions. The objective of our research is to study the function of HO-1 in protecting against apoptosis. In our research, HO-1 gene was transduced into human vascular endothelial cells (HUVEC) by DOTAP lipsomal transfection reagents to express. And then the apoptosis of HUVEC induced by tumor necrosis factor (TNF)-á　were analyzed by flow cytometry. After transfecting pcDNA3HO-1 into HUVEC, cells were homogenized in cell culture lysis reagent (CCLR). And