“益肝康”单味药对肝星状细胞活化TGFβ1信号通路的影响及其有效成分分析.pdf

中文摘要 “益肝康”单昧药对肝星状细胞活化TGF．8l信号通路的影 晌及其有效成分分析 摘 要 cellular 肝纤维化(hepaticfibrosis，HF)是肝脏内细胞外基质(extra matrix，EcM)弥漫性过度沉积性疾病，但无假小叶的形成。目前认为，肝 纤维化是各种慢性肝病发展至肝硬化(1ivercirrhosis，Lc)的中间环节和前 期病变。其发生机制主要是肝脏内ECM合成与降解失衡，表现为EcM stellate 在肝内的大量沉积。肝星状细胞(hepaticcells，Hscs)的活化、增殖 在此过程中发挥关键性作用。肝脏受损后释放多种细胞因子，如转化生长 factor 因子B1“ransfo咖inggrowth B1，TGF．B1)、血小板衍生生长因子 derived necrosisfactor (platelet growthfactor，PDGF)、肿瘤坏死因子a(tumor like cells，MFLcs)，胶原合成能力增加4—7倍，导致大量EcM沉积于肝脏， 此为肝纤维化发生、发展的核心环节。抑制HScs活化、增殖，诱导活化 Hscs凋亡，促进胶原降解是防治肝纤维化的主要途径。 是目前发现最强有力的致纤维化细胞因子，PDGF是最强的促HSCs增殖 因子。HsCs活化为MFLcs后可自分泌释放更多促纤维化细胞因子，形 成正反馈放大式反应，Hscs活化在此放大环中处于中心地位。 TGF-B1是目前功能最明确、作用最强的促肝纤维化细胞因子，在促 受体(TBR)结合形成TGF．B1．TGR信号复合体后，进一步磷酸化下游信号 一smad蛋白家族，将信号转入胞内，启动HScs的活化增殖。参与TGF．B 信号细胞内传导的相关蛋白统称为smad信号蛋白家族，为TGF．B下游信 号传导分子的统称，分为三类：受体Smad(R．smad)，其中的Smad2、3是 4，协助smad 与TGF．B1信号的细胞内传导。协同smadfco—Smad)，smad 7 2、3进入细胞核，调节基因表达。抑制性SmadrI．Smadl，其中1．smad 可竞争性拮抗R．Smad2、3与TGF．B1信号复合体的结合，阻断TGF．B1 J—— 1 中文摘要 目的：研究大鼠当归、赤芍、黄芪、丹参+黄芪小复方药物血清，及 中药单体阿魏酸、芍药苷、黄芪甲苷、原儿茶醛对HSCs增殖及TGF—B1 刺激后胶原合成的影响。 方法：应用HSCs细胞株体外培养技术。分别给正常、CCl4诱导肝纤 维化SD大鼠灌服当归、赤芍、黄芪、丹参+黄芪小复方水煎剂，剂量相 当于成人公斤体重日用量15倍，对照组灌服相应剂量生理盐水。连续灌 服5d，第5d灌胃后2h下腔静脉取血，分离血清，56℃水浴灭活，过滤 除菌。加入无血清RPMI一164 0．培养液，配制药物血清。1640培养基。IFN吖、 中药单体阿魏酸、芍药苷、黄芪甲苷、原儿茶醛加入2％RPMI．1640配制 为中药单体．1640培养基，过滤除菌。实验分组：N组：正常大鼠组： NA组：正常大鼠血清干预组；NB组：正常大鼠当归药物血清干预组；Nc 组：正常大鼠赤芍药物血清干预组； ND组：正常大鼠黄芪药物血清干预 组； NE组：正常大鼠丹参+黄芪药物血清干预组。A组：肝纤维化大鼠 组：AA组：肝纤维化大鼠血清干预组；AB组：肝纤维化大鼠当归药物 血清干预组； Ac组：肝纤维化大鼠赤芍药物血清干预组；AD组：肝纤 维化大鼠黄芪药物血