NMDA受体激活在急性肺损伤CCTα表达下调中作用及机制.pdfVIP

摘要 第一章MK801对小鼠油酸型肺损伤的保护作用 distress 研究背景急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorysyndrome， ARDS)是临床常见危重疾病，发病机制尚未完全阐明。肺内中性粒 细胞、巨噬细胞的滞留和激活在ARDS的发生发展中起重要作用。 中性粒细胞、巨噬细胞可释放谷氨酸。Said等人发现谷氨酸离子型 NMDA)可引起离体灌流肺发生高通透性肺水肿。近年来本室的研 LPS)和高氧等引起的肺损伤具有明显的保护作用，这些研究进一步 受体参与急性肺损伤的发生发展过程。但为证明内源性Glu的大量 释放过度激活NMDA受体在急性肺损伤的发生中具有普遍意义，尚 有待在不同模型上进一步证实。 方法(1)建立小鼠急性油酸肺损伤模型；(2)测量肺湿霞和干重的 比值(w／D)并观察肺组织病理变化，以反映肿组织的损伤程度； (3)测定支气管肺泡灌洗液中蛋白和白细胞含量，以反映支气管肺泡 毛细血管通透性变化；(4)生化测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)， 反映氧化损伤时的肺炎性改变；(5)RT-PCR和免疫组化分别检测 cytidylyltransferasealpha， 转录合成的变化。 结果油酸(O．1 h可引起肿组织肺指数、肺湿干 ml／kg)尾静脉注射4 重比W／D增加、肺组织MPO活性增加，支气管肺泡灌洗液中蛋白 和白细胞含量明显增加，并引起肺组织CCTamRNA和蛋白水平的 明显减低，病理切片示水肿、炎症渗出明显。NMDA受体的阻断剂 min可减轻油酸引起的上述变化。 MK。801(O．1mg／kg，ip)预处理30 结论油酸引起明显以炎性渗出为主的急性肿损伤，肺内NMDA受 体的激活参与油酸急性肿损伤的发生，并引起CCTot表达的下调。 关键词油酸， 急性肺损伤， MK．801，N一甲基一D．门冬氨酸受体， CTP：磷酸胆碱二胞苷酰基转移酶仅 第二章NMDA抑制CCTa表达的转录调控机制 cytidylyltransferase PC)合成中的关键调控酶。CCTa基因近端启动子区包含多个与细 1)结合位 胞生长、分化密切相关的转录因子Spl(specificityprotein 点。探讨Spl在CCTa启动转录中的作用具有一定的意义。在急性 肿损伤(acute lung 面活性物质(pulmonary 损伤的发生过程。本室前期研究证明一定剂量NMDA作用后，肺II 型上皮细胞合成CCTmRNA水平、CCTa蛋白表达水平均下降。本 CCTa表达的分子机制。 blot mRNA；(3)Westem 定量PCR定量检测Spl表达质粒后CCTa Westem 及NMDA处理对其影响。 h后，A549细胞CCTa核心启动 结果转染Spl真核表达质粒30 m 子报告基因相对萤光素酶活性增加，A549细胞CCTaRNA表达 h后，CCTct蛋白表达 水平表达水平增高。转染Spl真核表达质粒36 水平表达水平增高。A549细胞经NMDA处理8 h后，Spl蛋白表达 mRNA水平没有明．显的改变。 明显下降，并呈时间、剂量依赖。Spl 与DNA的结合活性下调。 仅的合成表达。NMDA通过下调核内Spl蛋白与DNA结合活性而抑 制CCTa的表达。 关键词转录因子Spl，转录调节，N一甲基一D一天门冬