多种策略逆转P糖蛋白和乳腺癌耐药蛋白介导肿瘤多药耐药.pdf

石智 多种策略逆转P一糖蛋白和乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药 多种策略逆转P．糖蛋白和乳腺癌耐药 蛋白介导的肿瘤多药耐药 专 业：肿瘤学 博士研究生：石智 导 师：符立梧教授 中山大学肿瘤防治中心 中文摘要 肿瘤细胞对抗癌药物产生抗药性，尤其是多药抗药性(mulfidrug resistance，MDR)，是肿瘤化疗失败的主要原因，也是肿瘤化疗领域急需解 决的难题。MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时，对结构和 作用机制不同的抗肿瘤药物产生交叉抗药性。MDR的形成机制十分复杂，包括肿 瘤细胞泵出药物增多和减少药物迸入，细胞周期检测点的紊乱，细胞凋亡途径变 化，药物靶点的改变以及DNA损伤修复系统障碍，等等。肿瘤细胞可通过不同途 径导致MDR的产生，同时单个MDR细胞可同时存在多种耐药性的机制，一种或 多种机制联合作用均可导致MDR产生。目前研究的比较多的、也是最为常见的机 cassette 制是肿瘤细胞过表达一类含有ATP结合框架的膜通道蛋白(ATP—binding transporters)。这类通道蛋白是一个大家族，目前发现它共有48 transporters，ABC 个成员，分为7大类，从ABCA至ABCG。在这个家族中，与肿瘤MDR关系最 resistance (multidrug c,a／icerresis诅nce 胞质亲水区为ATP结合位点，跨膜疏水区具有通道蛋白特性，构成其ATP依赖的 膜泵结构特点。一般认为当肿瘤细胞胞膜上过度表达这些膜蛋白时，这些膜蛋白 将结合抗癌药物，同时其ATP结合位点结合上ATP，然后ATP水鳃后释放的能量 使药物被泵到胞外，使细胞内的药物浓度始终维持在较低水平，肿瘤细胞从而获 石智 多种策略逆转P．糖蛋白和乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药 得耐药性。理论上克服MDR有两种方法：一、开发对MDR肿瘤细胞不具有抗药 性的新抗癌药物：二、寻找MDR逆转剂与抗癌药物合用，恢复MDR肿瘤细胞对 抗癌药物的敏感性。尽管现阶段现有的众多MDR逆转剂在体外及动物模型中都具 有很好的逆转效果，佃是在临床实验中，这些逆转剂由于可引起严重的毒副作用、 干扰传统抗癌药物的药代动力学等种种原因，都没有取得预期的临床效果，因 此急需开发新的逆转剂来逆转MDR。近年来，随着科学技术的迅猛发展，新的 生物技术如RNA干扰(RNA interfering，RNAi)的出现，新的天然药物的分离以及新 的化合物的合成，为成功开发MDR逆转剂带来了希望。 本课题先后采用多种策略来逆转P-gp和BCRP介导的肿瘤MDR，并取得了 较好的结果。 1．通过筛选发现，经PCR合成的MDRI．VsiRNA表达框架的干扰效果在五 个MDRl．(I．V)siRNA表达框架中是最好的，然后构建含有该表达框架的质粒 通过G418筛选得到稳定表达MDRIshRNA的细胞克隆KBv200／MDRIsh。 续稳定表达增强型绿色荧光蛋白和低水平的MDRI基因超过lO代。与KBv200细胞 到lO．5倍，对阿霉素的抗药性从74．5倍降到9．5倍，并且胞内的阿霉素积累从O．30 KB，2∞细胞移植瘤没有抑制作用。这些结果说明在体内和体外的模型中采用RNA 干扰技术沉默MDRI基因表达可以有效的逆转MDR。在探讨MDR形成机理及相 应的逆转机制的过程中，发现与敏感株细胞KB和MCF．7相比，MDR肿瘤细胞 of KB。200和MCF·7／Adr不仅过表达P·gP，而且凋亡抑制蛋白(inhibitorapoptosis 和长春新碱有很高的抗药性。而肿瘤细胞过表达P-gp和IAPs是形成MDR的两个 常见的机制。然而在MDR肿瘤细胞内P．gp和IAPs之间的相互关系目前还不清楚。