人类羰基还原酶基因CBR1和DCXR克隆及其编码蛋白功能研究.pdfVIP

人龚裴基还原辟基因强F，和删的克隆厦英端码蛋白的动能研宽 中文摘要 肝癌为我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第三 位，寻找和鉴定肝癌相关基因并研究它们的生物学功能，将有助于揭示肝癌的发 1．1．1．184) 生机制并为药物治疗提供选择药物的依据。羰基还原酶(C13Rs，EC 参与还原包括醌在内的各种羰基化合物，在解除细胞内的『F常代谢产物或外源性 化合物的毒性效应方面起着重要的作用。目前己发现的人羰基还原酶基因共有4 个，它们分别为c嗽，、De搬、c曰足j和c8R4。我室1998年利用同源克隆策略得 DCXR基因编码蛋白的功能及其可能的I临床应用价值进行分析。 本研究首先检查了这两个基因的表达状况。结果显示，人体16种组织的 CBRI和DCXR基因在肝脏中的表达量明显高于其它各组织，尤其是DCXR基因 在肝脏中的表达丰度远远高于其它各组织，这可能与肝脏的解毒功能有关。然而， 34对肝癌和癌旁组织的NorthernBlot、RT-PCR及免疫组织化学检测结果却显示， CBRl和DCXR基因在肝癌组织中的的表达水平显著低于正常对照，这间接反映 出肝组织癌变时解毒功能受到严重损害，也可能反映了肝癌的发病机制与肝脏解 毒功能有某种关联。 我们对原核表达的重组CBRl和DCXR蛋白进行了还原酶活性分析，发现 它们都能特异性地还原典型的醌类底物9，lO一菲醌和醛酮类底物吲哚满二酮， 具有羰基还原酶活性。当酶促反应体系pH值为6．2左右时，酶催化底物的活性 最强，这与相关文献的报道相一致。为了判断它们在肝癌中显著下调表达的特征 是否可用于指导临床用药，我们分析了这二种酶对17种抗癌药物的代谢能力。 辛(SALVICIN)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。 分予存在差异的表儿茶索没食子酸酯(ECG)分子，我们却检测不到这种脱氢酶 进行诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞的实验，结果发现：当药物浓度达到20ug／ml 基因的表达产物具有拮抗EGCG诱导细胞凋亡和诱导细胞G1期阻滞的作用。 人类薮基还原酶基因(SRl和OC／h的克隆夏其蝙码蛋白的功能研究 响正常细胞)的表观性状可能与在正常成人肝组织中大量表达而在肝癌组织中下 调表达的CBRI蛋白对EGCG的灭活作用有关，这对临床用药可能具有重要的 指导意义。 进一步的研究还显示，在肝癌细胞株Focus中稳定表达DCXR蛋白能使细 在临床剂量范围内拮抗常用抗癌药物柔红霉素和长春新碱的毒性的实验结果提 示，DCXR蛋白可作为研究醛酮类抗肿瘤药物药效的一种新的标志物。 我们的这项研究表明，CBRl和DCXR是两种在肝脏中高丰度表达的解毒蛋 白，它们在肝细胞发生癌变时表达锐减。它们的代谢底物虽然都是含羰基的醛酮 类及醌类化合物，但对各种具有上述结构的抗癌药物的底物特异性却存在较大差 别。CBRl对表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的代谢作用最强，在肝癌细 能引起细胞对这两种药物的耐受性的提高。二者对不具有上述结构的5一氟尿嘧 啶的代谢作用均很弱。这些初步的研究结果提示，肝癌组织中C8RJ和DCXR两 个基因的表达丰度的变化可作为临床医生选用抗癌药物的一种参考指标。 关键词羰基还原酶，表达谱，肝癌，柔红霉素，表没食子儿茶素没食子酸酯，长 春新碱，细胞凋亡 人类裴基还原酶基因CBRI和DCXR的克隆茂其壕码蛋白的功能研究 Abstract 1．1．1．1 tothe of reductases(EC superfamily Carbonyl 84，CRs)，belonging monomericand withbroadsubstrate oxidoreductases，are mostly cytosolicenzymes