骨组织工程种子细胞―――骨髓间充质干细胞研究进展.DOCVIP

临床医学论文-骨组织工程种子细胞―――骨髓间充质干细胞研究进展 【关键词】? 子细胞 【摘要】 目的 综述近年来骨髓间充质干细胞体外培养、定向分化为成骨细胞的条件及相关研究进展。方法 查阅大量相关文献，整理、综合、分析骨髓间充质干细胞的研究进展。结果 骨髓间充质干细胞具有增殖和分化潜能，在特定条件下可定向分化为成骨细胞，目前倾向于多因素联合应用或序贯使用促进骨髓间充质细胞高效表达成骨标志产物，提高成骨率。结论 骨髓间充质干细胞可满足骨组织工程中种子细胞的要求，具有广阔的发展前景和临床应用价值。 关键词 组织工程 骨髓间充质干细胞 成骨 骨组织工程学研究内容包括种子细胞、载体、诱导物质以及组织工程化骨组织的临床应用等诸多方面，其中种子细胞是组织工程研究中首要的、最基本的环节。20世纪70年代中期 ［1］ 就已证实骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesˉenchymal stem cells，BMMSCs）具有自我增殖能力和分化潜能，而且BMMSCs具有来源广泛、取材简单、分化成骨潜能强等特点，成为目前骨组织工程种子细胞研究的重点。 1 骨髓间充质干细胞体外培养研究进展 干细胞是指那些具有高度增殖和自我更新能力，并能分化为两种以上不同类型组织细胞的细胞;组织干细胞是指发育成熟的个体内具有多向分化潜能的细胞，目前比较明确的能够转化的组织干细胞主要是骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）。Freidenˉstein ［1］ 发现了骨髓培养中有呈纺锤状的少量贴壁细胞，能够分化形成多种中胚层组织，包括:骨、软骨、肌腱、肌肉组织、骨髓基质结缔组织等，这种形成集落的初始骨髓基质细胞被称为成纤维细胞样细胞集落形成单位（Colony forming unit-firbroblastic，CFU-F）。Mingnell ［2］ 认为BMMSCs为存在于骨髓基质中的非造血来源的细胞亚群，Ashton ［3］ 称其为骨髓基质成纤维细胞。BMMSCs对营养条件要求高，而且含量很低，约为0.001%～0.01%，要利用BMMSCs就必需实现其体外分离培养及扩增 ［4］ 。BMMSCs培养方法主要有全骨髓培养法和离心培养法，前者是将无菌抽取的骨髓加入培养液制成细胞悬液，原代培养培养物以造血细胞成分居多，为利于BMMSCs的贴壁生长，可采用DMEN和胎牛血清。胎牛血清终浓度为10%～20%，塑料培养瓶较一般玻璃培养瓶更有利于BMMSCs贴壁生长。有人主张用4%醋酸溶解RBC，去除RBC对BMMSCs的贴壁干扰，但有人认为RBC会随着换液而逐渐被自然去除，对BMMSCs影响不大。细胞融合后以1:2比例传代，3～4天换液一次 ［5］ 。离心培养法是根据骨髓中细胞成分比重的不同，采用离心分离法提取单核细胞进行培养。在新鲜无菌的骨髓抽取物中加入抗凝培养液稀释，以1500～2000r/min离心20～30min，采集交界处的单核细胞层，PBS洗涤2～3次后，加入培养液接种培养。机体内BMMSC数量很少，接种数目太少会影响成骨率，太多对于临床应用又不太现实，每立方厘米载体接种1×10 6 个细胞就能满足成骨要求。 目前，三维细胞培养技术已在骨组织工程中得到广泛应用，Kinoshita ［6］ 等利用胶原凝胶载体培养BMMSCs，发现三维的胶原网络能有效的刺激成骨细胞分化;Glowacki ［7］ 等采用培养液灌注造成动力性三维细胞培养环境，增加了细胞的适应生存能力及成骨功能。三维细胞培养能够有效地种植功能细胞、保持旺盛的细胞活性、最大程度地发挥细胞的功能。特别是流体力学刺激可通过PGE 2 途径将力学刺激转导至细胞内发挥调节作用，能够明显增加成骨细胞增殖，总蛋白合成和DNA合成增加 ［8］ 。 2 骨髓间充质干细胞定向分化的研究进展 特定条件下，组织干细胞才能向成骨细胞转化，骨髓间充质干细胞成骨很大程度上依赖于体外培养条件，而且，BMMSCs的定向分化还受到其他多种条件的制约和影响。体外细胞的分化程度决定着成骨的成败，加入成骨诱导剂可促使BMMSCs向成骨细胞分化。化学物质（如Dex、1，25（OH） 2 D 3 、β-GP、维生素C等），细胞因子（如BMP、TGF-β、bFGF等）可促进BMMSCs成骨过程中标志产物ALP、BGP、骨桥蛋白、骨涎蛋白等高效表达及矿化结节形成，提高成骨率。迄今为止，对这些诱导物的作用机制知之甚少，而且不同诱导剂的作用又不尽相同 ［9～11］ 。 大量实验研究发现:Dex作用于BMMSCs后，骨髓间充质干细胞ALP活性增强，骨钙素（BGP）、骨涎蛋白、骨桥蛋白的合成明显增加。Dex可促进BMMSCs的成骨分化，早期以促进基质合成为主，后期以促进矿化为主。Dex促进