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乳腺癌血浆循环核酸p53基因突变的意义 作者：吕韶敏　汪海丹　斯晓明　张燕军　张亮　潘伯荣　任军 【关键词】 乳腺肿瘤 关键词: 乳腺肿瘤;DNA，血浆;突变，p53基因 摘 要:目的 探讨血浆循环核酸p53基因突变检测的可行性，研究乳腺癌患者循环核酸p53基因突变对于乳腺癌发生、发展和预后估计的临床意义. 方法 应用聚合酶链反应（PCR）扩增p53基因外显子5～8，并用变性高效液相色谱技术（DHPLC）分析产物突变情况，再与各生物学参数进行了相关研究. 结果 33例患者中14例（42.4%）p53基因突变，且突变率与组织分化级别、ER阴性显著相关（Plt;0.05），与临床分期和淋巴结及远处转移情况无关. 结论 DHPLC可作为一种快速简便的基因突变检测手段，p53基因突变在乳腺癌循环核酸中有较高的检出率并预示肿瘤的恶性程度，血浆基因突变有望成为简便的预后参考指标. 　　Keywords:breast neoplasms;plasma DNA;p53gene;muta-tion 　　Abstract:AIM To evaluate the presence of tumor DNA in plasma and study the clinical significance of p53gene muta-tions associated with the development and prognostic signifi-cance in breast cancer.METHODS Extraction of DNA from patients’plasma and the target DNA fragments were ampli-fied by PCR.The production were analyzed by denaturing high performance liquid chromatography（DHPLC）.The mu-tation status obtained by DHPLC was confirmed by DNA se┐quencing.RESULTS The total p53gene exon5to exon8mutation rate was42.4%（14/33）.There were statistically significant associations between p53gene mutation and histo-logical grade，ER（-）（Plt;0.05），but no significant associa-tion was found between mutation and clinical stages or metas┐tasis.CONCLUSION P53gene exon5to8can be amplified in breast cancer patients’plasma DNA.DHPLC is an accu-rate，rapid and economic way to screen mutation in plasma DNA amplified fragment，and plasma DNA mutation detec-tion by this method offers a new approach for prognosis. 　　0 引言 　　p53基因是目前人类肿瘤中最常变化的抑癌基因，大量研究表明p53基因的丢失或突变失活与乳腺癌的发生、发展密切相关，其突变点主要集中于第5～8外显子［1］ .血浆DNA是稳定存在于血浆中的DNA片断，正常人血浆DNA水平很低，难以检测到，而恶性肿瘤患者血浆DNA含量显著增高，超过健康人10～100倍以上.恶性肿瘤患者的血浆DNA多来源于肿瘤原发灶代谢活跃的或者脱落死亡的肿瘤细胞，可较稳定地存在于血浆中，导致肿瘤患者血浆DNA明显高于正常人［2］ .本研究采用PCR及DHPLC方法对33例乳腺癌患者血浆进行DNA提取及p53基因外显子5～8的突变分析，并与测序结果对比，证实了乳腺癌血浆中可检测到p53突变，建立了一种快速、简易检测乳腺癌DNA突变的新方法，为临床的诊断、预后提供了较好的肿瘤标志. 　　1 对象和方法 　　1.1 对象 取自2001-06/2002-01在我科住院的33例术后病理确诊的乳腺癌患者，均为女性，年龄在36～67（中位年龄54）岁.浸润性导管癌29例，