山莨菪碱对脂多糖结合血管内皮细胞及诱导NO合成的抑制作用.docVIP

山莨菪碱对脂多糖结合血管内皮细胞及诱导NO合成的抑制作用 【关键词】 山莨菪碱 　　关键词: 山莨菪碱;内皮，血管;脂多糖类;一氧化氮 　　摘 要:目的 实验观察山莨菪碱对细菌脂多糖（LPS）结合血管内皮细胞膜及诱导NO生成的影响. 方法 体外分离培养牛主动脉血管内皮细胞，用免疫组化显色反应显示细菌脂多糖与血管内皮细胞的结合，并通过图像分析对结果进行半定量;用高压液相色谱分析细胞培养液中NO 3- 的含量，间接反应NO的生成水平. 结果 细胞分组处理，间接法显色后图像分析，结果表明山莨菪碱组的平均灰度值明显低于LPS组（Plt;0.05）;并且对细胞培养液中NO 3- 的检测显示山莨菪碱组的浓度明显低于LPS组（Plt;0.05）. 结论 山莨菪碱能够抑制LPS结合血管内皮细胞，并且能够抑制LPS对NO合成的诱导作用. 　　Keywords:anisodamine;endothelium，vascular;lipopolysac-charides;nitric oxide 　　Abstract:AIM To investigate the effect of anisodamine on lipopolysaccharides attached to the membrane of endothelium and inducing the releasing of nitric oxide（NO）.METHODS The bovine aortic endothelial cells（BAEC）were isolated and cultured for study.The lipopolysaccharides（LPS）at-tached to the membrane of endothelium was detected by im-munocytochemistric means.The NO 3- level which reflected the releasing of NO in culture medium was determined by high-performance liquid chromatography.RESULTS Af-terbeing treated with LPS，the group incubating with aniso-damine showed there had less LPS attached on than the group treated with LPS only.And the NO 3- level of the group in-cubating with anisodamine was lower than the group treated with LPS only.And the NO　3- level of the group incubating with anisodamine was lower than the group treated with LPS only.CONCLUSION This result suggests that anisodamine can significantly inhibit the LPS attached to the membrane of endothelium and inducing the releasing of NO. 　　0 引言 　　研究与临床实践证明大剂量的山莨菪碱对于抢救内毒素休克有效，其研究的结果表明其抗休克的作用机制主要在细胞水平上.近年对大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）识别结合细胞膜上受体，引发各种病理生理过程的研究日渐深入.本实验旨在通过体外培养血管内皮细胞，观察山莨菪碱对LPS结合血管内皮细胞膜上受体以及诱导NO合成的影响，以此进一步揭示山莨菪碱抗内毒素休克的作用机制. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　 ①药品与试剂:Ⅰ型胶原酶;正辛胺（n-octylamine）;大肠杆菌脂多糖E.coil O11B4（lipopolysaccharides，LPS，美国Sigma公司）;RPMT-1640培养基（美国Gibco公司）;抗LPS单克隆抗体参照马越云等［1］ 建立的方法制备;Ⅷ因子相关抗原抗体与CD14单克隆抗体（武汉博士德生物技术公司）;辣根过氧化酶（HRP）标记的山羊抗小鼠IgG抗体（华美生物工程公司）;盐酸消旋山莨菪碱（芜湖长江药业有限公司产品，批号9806192）.地塞米