基因工程应用--转基因生物技术.pptVIP

将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。 人们常说的遗传工程、基因工程、遗传转化均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为遗传修饰过的生物体（Genetically modified organism，简称GMO）。 主要教学内容 6.1 转基因植物技术 6.1.1 高等植物的基因转移系统 6.1.2 转基因生物的鉴定 6.1.3 植物基因工程的应用 6.2 转基因动物技术 6.2.1 培育转基因动物的基本操作过程 6.2.2 外源基因导入动物的方法 6.2.3 转基因动物的研究成果及应用 教学要求 6.1 植物基因工程（P229） 将人工分离、修饰过的功能基因导入植物的基因组中，从而引起植物体性状的可遗传改变。 植物的基本特征 遗传操作的简易性 大多数高等植物具有自我授精的遗传特征，通常能产生大量的后代；而且借助于风、重力、昆虫传播等自然条件，授精范围广、速度快、效率高。 因此，即便是频率极低的基因突变和重组事件，其遗传后果也易被观察。 整株植物的再生性 植物损伤后，会在伤口长出一块软组织，称为愈伤组织。如果将一小片鲜嫩的愈伤组织取下，放在含有合适营养和植物生长激素的组织培养基中，则这些细胞便会持续生长并分裂成悬浮液。 将这些细胞涂在特定的固体培养基上，就会长成新的幼芽，并且这些愈伤组织重新分化成为叶、根、茎，最终成为整株开花植物。 愈伤组织的细胞分化取决于植物生长素（Auxins）和分裂素（Cytokinins）的相对浓度。生长素与分裂素之比高，则根部发育；生长素与分裂素之比低，则茎部发育。 植物细胞通常不能有效地吸收外源DNA，因为它们具有纤维素构成的细胞壁。 可用纤维素酶处理植物细胞壁，形成原生质体，待吸收DNA分子后，经过再生，再通过愈伤组织形成培育出整株植物。 这项技术有一定的局限性，即大多数单子叶农作物（如谷类作物）很难从原生质再生出完整细胞。 染色体的多倍体性 很多高等植物拥有比人类更大的基因组，并以多倍体的形式存在。 大约三分之二的禾本科植物呈多倍体型，其染色体数目范围从24至144不等。 这种多倍体植物在组织培养过程中呈现出较高的遗传不稳定性，导致体细胞变异。 高等植物基因工程的发展历程 1983 年 美国和比利时科学家首次将外源基因导入烟草和胡萝卜 1994 年 世界上第一种耐储藏的番茄在美国批准上市 1995 年 转基因的抗虫、抗除草剂的玉米和棉花在美国投入生产 2000 年 美国转基因大豆的种植面积首次超过普通大豆 迄今为止 世界上共批准了12种作物、6大类性状的48个转基因品种进行商业化生产，其中包括水稻、玉米、马铃薯、小麦、黑麦、红薯、大豆、豌豆、棉花、向日葵、油菜、亚麻、甜菜、甘草、卷心菜、番茄、生菜、胡萝卜、黄瓜、芦笋、苜蓿、草莓、木瓜、猕猴桃、越橘、茄子、梨、苹果、葡萄等。 6.1.1 高等植物的基因转移系统 1） Ti 质粒的结构与功能 几乎所有的双子叶植物尤其是豆科类植物的根部常常会形成根瘤，这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌（A.tumefaciens）感染所致，其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型质粒 Ti（Tumor-inducing）介导的。 Ti 质粒的图谱 整个质粒 160～240 kb 其中 T-DNA 12～24 kb tms 的编码产物负责：合成吲哚乙酸 tmr 的编码产物负责：合成植物分裂素 tmt 的编码产物负责：合成氨基酸衍生物冠瘿碱 Ti 质粒致瘤的分子机制 损伤的植物根部会分泌出乙酰丁香酸和羟基乙酰丁香酸，它们能诱导Ti质粒上的vir基因以及根瘤菌染色体上的一个操纵子表达。 vir基因产物将Ti质粒上的T-DNA单链切下，而根瘤菌染色体上的操纵子表达产物则与单链T-DNA结合形成复合物，后者转化植物根部细胞。 T-DNA的染色体整合机制 2）Ti 质粒的改造 除去T-DNA上的生长素（tms）和分裂素（tmr）生物合成基因；大量的生长素和分裂素会抑止细胞再生长为整株植物； 除去T-DNA上的有机碱生物合成基因（tmt）；因为有机碱的合成大量消耗精氨酸和谷氨酸，影响植物细胞的生长； 除去 Ti 质粒上的其它非必需序列，最大限度地缩短载体的长度； 安装大肠杆菌复制子，使其能在大肠杆菌中复制，以利于克隆操作； 安装植物细胞的筛选标记，如 neor 基因，使用植物基因的启动子和polyA化信号序列； 安装多聚人工接头以利于外源基因的克隆。 共整合转化程序 二元整合转化程序 将外源基因克隆在大肠杆菌-农杆菌穿梭质粒的T-DNA区内； 重组质粒直接转化农杆菌株，该菌株携带只含vir区不