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第3章 细胞工程与食品产业 细胞工程技术在食品领域的应用 1、植物组织培养技术 利用植物外植体在固定培养基上培养，获得愈伤组织继而获得完整植株，即为植物组织培养，也称离体培养或外植体培养。 植物组织培养的基本步骤： 2、药用植物细胞的大规模培养 植物细胞能积累多种次生代谢产物，包括生物碱、有机酸、色素、糖苷类、挥发油、酶类、植物激素、植物杀菌素等。 当今世界市场上已知300 多种生物产品中，90% 以上的产品主要成分能从高等植物中找到。 目前，已发现60 多种药用植物细胞培养物能产生特定的药用次生代谢产物，其中超过30 种细胞培养物中的含量接近或超过亲本中的药物成分含量。 （1）红豆杉—紫杉醇： 紫杉醇(Paclitaxel)是继阿霉素和铂类抗癌药之后20世纪后期最受人们重视的一种抗癌新药。 1967年美国化学家Wall和Wani等首先从太平洋紫杉（短叶红豆杉，Taxus. brevifolia）树皮中提取出来。该药于1990年进入Ⅲ期临床试验， 1992年底获美国FDA批准上市。 紫杉醇存在于红豆杉属植物的树皮、叶及茎中， 其中树皮中的含量最高，大约从12000株成年紫杉树中才能提取1KG的紫杉醇，而且紫杉的生长周期很长，在世界分布很少。 紫杉醇的国际市场价格为450美元/g 日本有关组织从红豆杉中诱导产生愈伤组织，筛选得到细胞培养4周就增殖了5倍，紫杉醇的含量达到了0.05％，比树皮中紫杉醇的含量高达10倍。 Ketchum从6种紫杉醇属植物中进行愈伤组织的诱导，获得了产生紫杉醇的高产细胞株，在悬浮培养下，细胞内的紫杉醇含量超过了20mg/L。 清华大学化工系生物化工研究所通过固液两步培养法可以在4周内获得20g/L干物质，利用代谢调控技术在2~3天内将紫杉醇的含量提高到0.063%左右。 （2）紫草宁—紫草： 紫草宁可用作创伤、烧伤以及痔疮的治疗药物，同时又因为其漂亮的紫红色而作为高级色素使用。 紫草宁产生于亚洲的多年生 植物紫草的根部 。但紫草资源严重不足，在日本，紫草已濒临灭绝，在我国，紫草（Arnebia euchroma)列入了国际二级保护植物。 紫草的人工栽培成活率低，而且直接提取紫草宁的无法满足市场需求。化学合成紫草宁的工艺非常复杂，且最终产率只有0.7％，生产成本昂贵。 紫草宁在国际市场上售价高达7000美元/kg 1974年Tabata等就研究了用于培养紫草细胞的培养基。 1981年Tabata和Fujita等又用大的培养容器进行细胞悬浮培养并获得了紫草宁衍生物。 日本在1983年进行紫草细胞大规模培养来生产紫草宁。 我国南京大学等从1986年开始对该项目进行研究，在进行大量的研究之后得出， 在适当的条件下，培养的紫草细胞悬浮物中紫草宁含量占干重的14%，比紫草根中 的含量高10倍。 （3）水母雪莲，全草均可入药，有祛寒、补血之功能；主治风湿性关节炎及肾虚、腰痛等症，水母雪莲还有强心作用。 3、植物细胞培养生产重组蛋白 植物悬浮细胞能像微生物一样能在简单的培养基中较快地生长,培养基不需要做特殊处理,不需要太昂贵的生产设备; 也能像动物细胞培养一样合成较复杂的多聚体蛋白和糖蛋白,如免疫球蛋白和白细胞介素,而且不携带人类病原菌,不产生内毒素; 它还能像完整植物培养系统一样进行转入后的修饰、翻译后的糖基化。 植物细胞作为宿主细胞的取材： 烟草细胞株B Y22 和N T21 是应用最为广泛,因为它们的细胞易于转化和繁殖,有较好的生长特性。 但是近来的研究表明:水稻、番茄和大豆细胞株是比烟草细胞株更为合适的宿主细胞,因为水稻、番茄和大豆本身可以食用,可调控性好,表达水平较高,能有效地分泌蛋白,而且蛋白含量较高。 植物细胞生产GMP的缺点： 重组蛋白在生产中的稳定性 外源基因的逃逸 　　稳定整合在植物基因组中的外源DNA 将与植物基因组DNA 一起参与几乎所有的遗传学行为,因此,这些外源DNA 不仅仅存在于该转基因植物的后代,也有可能随该植物细胞培养过程中向环境中漂移或者引起基因的沉默。外源基因漂移或沉默后,目的重组蛋白的产量就下降了。  4、动物细胞融合的应用 ——单克隆抗体技术 B 细胞： 骨髓瘤细胞： 细胞融合的方法： “生物导弹”：把这种抗体“导弹”注射到癌症患者的血液中，它就会发挥导弹一样的作用，在患者体内追踪并附着于癌细胞上，然后与抗体结合的抗癌药物或毒素杀伤和破坏癌细胞，而且很少损伤正常组织细胞。 单克隆抗体在疾病的诊断 和治疗预防方面，与常规 的抗体相比，特异性强， 灵敏度高，优越性非常明显。 细胞工程的其他技术 植物的胚胎培养和离体授粉(试管受精) 植