基于DGGE技术的混合糖发酵产氢菌的分离及特性研究.doc

国内图书分类号：Q93 国际图书分类号：579  学校代码：10213 密级：公开  理学硕士学位论文 基于 DGGE 技术的混合糖发酵产氢菌的分 离及特性研究 硕 士 研 究 生：邱颉  导  师：任南琪教授  申 请 学 位：理学硕士  学  科：微生物学  所 在 单 位：市政环境工程学院 答 辩 日 期： 2009 年 6 月 授予学位单位：哈尔滨工业大学 Classified Index: Q93 U.D.C: 579 Dissertation for the Master Degree in Scinece SEPERATION OF BIO-HYDROGEN PRODUCTION BACTERIUM FROM XYLOSE-GLUCOSE MIXTURE AND ITS HYDROGEN PRODUCTION PROPERTIES  Candidate： Supervisor： Academic Degree Applied for： Speciality： Affiliation： Date of Defence： Master-Conferring-Institution：  Qiu Jie Prof. Ren Nanqi Master of Science Microbiology School of Munici.＆Envir.Eng. June, 2009 Harbin Institute of Technology 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文  摘  要  厌氧发酵生物制氢工艺是一种新型的、低能耗的、清洁的废弃物资源化处 置方式。它不仅能够生产清洁能源氢气，还可以利用有机废物这种用之不竭的 可再生资源，有利于环境保护与社会的持续发展。目前，限制生物制氢技术发 展的主要因素之一就是底物利用率较低且成本过高。木质纤维素类生物质在自 然界中存在十分广泛，而其中有 89%尚未被利用或合理利用，这类物质经预 处理后释放的糖类中主要含有葡萄糖和木糖 2 种成分，因此若能同时利用这两 种糖类进行发酵产氢，不仅可以避免资源的浪费更对能源危机的缓解具有重要 的意义。本研究立足于利用木糖-葡萄糖混合糖发酵产氢，结合 DGGE 技术筛 选发酵木糖-葡萄糖混合糖产氢的优势菌群，并从中分离出高效产氢菌种，进 而对影响其产氢的主要条件进行优化，以期获得更高的产氢能力。 本研究分别在控制 pH 与不控制 pH 两种情况下，通过传代培养的方式从 瘤胃液中富集得到产氢优势菌群，控制 pH 值时产氢菌群的产氢量比不控制时 高，分别为 2.23molH2/mol 葡萄糖， 1.95molH2/mol 木糖， 2.11molH2/mol 混 合糖。结合 DGGE 技术分析富集过程中产氢菌群的群落动态变化，结果表明 在控制 pH 值的体系内菌群结构比不控制 pH 的体系更丰富一些。混合糖底物 最终形成的优势菌群的组成主要是 Clostridium 和 Citrobacter 属。 以从富集得到的产氢优势菌群中分离出的一株高效产氢菌 Clostridium butyricum T4 为研究对象，分别探讨了初始 pH 值和混合糖中木糖 与葡萄糖的质量比对菌株 T4 的生长及产氢过程的影响。结果表明 T4 利用木 糖-葡萄糖混合糖产氢的最佳生长初始 pH 值为 8.0，最佳产氢初始 pH 值为 7.0，最大氢气产量为 2.21molH2/mol 混合糖。考察木糖与葡萄糖的比例对 T4 生长及产氢过程的影响时发现，当木糖与葡萄糖的质量比为 3：1 时“葡萄糖 效应”不明显，此时混合底物中各糖的利用率均最大，木糖、葡萄糖与总糖的 利用率分别为 83.7%，99.44%和 97.6%。菌株在木糖与葡萄糖质量比为 1：2 的体系中累积产氢量和氢气含量均最大，分别为 1200ml/L 和 52.6%。 通过向体系中额外添加乙酸钠和丁酸钠，考察主要液相末端产物对 T4 发 酵木糖 -葡萄糖混合糖产氢过程的影响，结果发现累积产氢量、发酵末端 pH 以及总糖的利用率均比对照组高，且都随外加乙酸钠浓度的增加而升高。累积 产氢量最大为 1950ml/L 培养基；乙酸钠为 20g/L 时体系的末端 pH 最高为 5.91。而在添加丁酸钠的体系中，累积产氢量最大可达到 1800ml/L 培养基， -I- 哈尔滨工业大学理学硕士学位论文 此后随丁酸钠质量浓度的增加而降低，外加丁酸钠对体系的缓冲能力高一些， 丁酸钠浓度为 20g/L 时末端 pH 值最大可达 6.1。在氢气产量方面，外加乙酸 钠和丁酸钠时的氢气产量均比对照组降低了。研究还发现额外添加乙酸钠和丁 酸钠对于发酵末端产物的影响不同，添加乙酸钠时，乙酸和丁酸的产量随乙酸 钠加入量