年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨髓间充质干细胞功能.pdfVIP

广州医学院硕士研究生 年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨髓间充质干细胞功能 年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨 髓间充质干细胞功能 硕士研究生： 黎 佼 导 师： 刘世明 教授 中文摘要 研究背景及目的 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC ）对间充质 组织功能的维持和修复起重要作用。干细胞的减少可能导致脑、肝脏、皮肤、骨 骼等相关退行性疾病的发生。小鼠BMSC随年龄增加，多种细胞功能发生改变， 包括细胞集落形成单位功能下降，成骨细胞、脂肪细胞以及成软骨细胞分化能力 下降，细胞增殖能力下降，细胞端粒酶活性下降，端粒长度缩短。最近的研究表 明细胞融合作为一种有效的再调控细胞功能的方法，得到广泛关注。有研究表明 骨髓间充质干细胞可与小肠干细胞、肝脏细胞、心肌细胞等细胞融合并改变其功 能。本文的研究目的是诱导年轻与年老小鼠BMSC融合，探讨融合后年轻BMSC 对年老BMSC功能的影响。 研究方法 年轻 (2-3月龄) 及年老 (18-24月龄) C57BL/6 小鼠BMSC在红色荧光染料 PKH26标记后分别与年轻及年老绿色荧光蛋白转基因C57BL/6小鼠BMSC通过聚 乙烯二醇 (PEG 1500) 诱导，建立细胞融合模型。通过流式细胞仪鉴定细胞融合 率和细胞表面特异性抗原的表达。免疫荧光显微镜观察融合细胞形态及细胞核特 性。通过细胞计数比较5组细胞(年轻组Y ，年老组O, 年轻融合组Y-Y, 年轻年老 融合组Y-O,年老融合组O-O) 在2d 、4d 、6d、8d的细胞增殖能力。诱导细胞向成 骨细胞及脂肪细胞分化，比较5组细胞的分化能力。 2 广州医学院硕士研究生 年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨髓间充质干细胞功能 结果 通过PEG 诱导，可获得30.45%±4.13%的融合细胞，3 组不同年龄融合组的 细胞融合率无统计学差异，具体数值为 (29.41%±3.00% vs. 30.54%±1.20% vs. 31.41%±6.63%) ，P0.05 。融合细胞表达间充质干细胞表面特异性抗原CD44、 Sca-1，而不表达造血干细胞表面特异性抗原CD34、CD117、CD31、CD45 。在 2d 、4d 、6d、8d，Y-O 组细胞数量增加百分率比 O-O 组均显著增高，具体数值 为 (122.2%±4.6%) vs. (104.64%±1.25%) ；(213.25%±15.29%) vs.(130.02%±6.82%)； (318.46%±19.86%) vs. (179.4%±9.54%) ； (439.98%±24.09%) vs. (240.03%±28.07%) ；P 0.05 。代表成骨细胞分化能力强弱的茜素红染色阳性率 和代表脂肪细胞分化能力强弱的油红O 染色阳性率，Y-O 组比O-O 组均显著增 高，具体数值分别为(25.46%±1.52%)vs.(13.85%±1.69%) ，P 0.01 ；(12.99% ±2.61%)vs.(6.03%±1.71%) ，P 0.05 。 结论 1. 在其他条件相同的情况下，随着年龄的增长，BMSC增殖功能、成骨细 胞及脂肪细胞分化功能明显减退。 2. 年轻与年老BMSC通过PEG诱导融合后，能保持干细胞的特性。 3. 年轻BMSC可通过细胞融合改善年老BMSC增殖功能、成骨细胞及脂肪细 胞分化功能。 关键词 骨髓间充质干细胞； 年龄； 脂肪细胞； 成骨细胞； 细胞融合 3 广州医学院硕士研究生 年轻骨髓间充质干细胞可通过细胞融合改善年老骨髓间充质干细胞功能 Aged bo