沉默ABCG2基因逆转多耐药小细胞肺癌细胞对化疗药物的抗药性.pdf

／㈣ 沉默ABCG2基因逆转多耐药小细胞肺癌细 胞对化疗药物的抗药性 硕士研究生：关俊明 指导教师：闫玉生郭琳琅 摘 要 研究背景： 肺癌是导致人类癌性死亡的首位疾病，全球每年因肺癌死亡人数超过100万， cell 其中80％～90％的患者为tH,细胞肺癌(non—smalllungcancer,NSCLC)， cell 15％一25％为小细胞肺癌(smallcancer,SCLC)，由于小细胞肺癌在肺癌 lung 各病理分型中分化程度最低，较早的发生血道转移，因此预后极差。临床上病 理确诊为小细胞肺癌的患者，由于对化疗极其敏感，所以采取化疗为主要的治 疗方式，但很快就会出现肿瘤耐药，化疗失效，导致小细胞肺癌患者早期出现 肿瘤进展、复发、转移，5年生存率不足10％。因此化疗的耐药性是临床小细胞 肺癌治疗的最大问题之一，如何减少小细胞肺癌对化疗药物的耐药性是基础、 临床工作者亟待解决的关键问题。 多药耐药是获得性耐药最重要的一种耐药形式，主要是指对已经接触过抗 肿瘤药物无论在功能上或结构上都不相关的多种药物具有获得性耐药。目前认 为，肿瘤耐药机制主要有：(1)药理耐药(pharmacologicalresistance)：指由机体 对药物的影响所导致的耐药，如药物进入机体代谢增强或活化障碍，肿瘤血供 不足，药物组织亲透力差，药物避难所的形成等；(2)微环境耐药 (microenvironment resistance)：是指肿瘤细胞的存活和生长有赖于器官微环境， 而器官微环境可以通过不同的耐药基因表达来影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感 性；(3)凋亡耐药(apoptosis 中文摘要 凋亡受抑；(4)生化耐药(biochemical resistance)：指肿瘤细胞的遗传性及生化特 性发生复杂的变化，使细胞通过不同途径对药物耐药，其中研究最为广泛的是 ABC膜转运蛋白超家族成员，即药物输出泵，如P一糖蛋白(P．gp)，多药耐药相 W等研究乳腺癌 关蛋白(MRP)，肺耐药相关蛋I刍(LRP)。1998年DoyleLA，Yang cancerresistance cassette Gmember2，ABCG2)，此蛋白可将化疗药物 2(ATP2bindingsuper-family 泵出胞外，使细胞内化疗药物的浓度明显降低，使化疗失败，从而导致肿瘤细 胞产生耐药性。 我们的前期基因芯片筛选结果表明，在小细胞肺癌耐药细胞株与亲本细胞 株，ABCG2的表达有明显的差异。基于ABCG2在小细胞肺癌耐药细胞株与亲 本细胞株表达差异，我们推测ABCG2在小细胞肺癌耐药方面起了重要作用，探 讨ABCG2在小细胞肺癌细胞耐药性产生的作用，为临床解决小细胞肺癌治疗中 极易出现的耐药性问题提供新的理论依据。 目的： 1．本实验选择小细胞肺癌细胞株H69与其多药耐药细胞株H69AR做为研究 对象，分析两细胞株形态学、对化疗药物敏感性的差异。 2．分析小细胞肺癌细胞株H69与其多药耐药细胞株H69AR细胞株在mRNA 和蛋白水平ABCG2表达的差异。 默后，检测其效果，观察H69AR细胞株耐药性的变化。 方法： 1．光学显微镜下观察小细胞肺癌细胞株H69与其多药耐药细胞株H69AR二 者形态学变化。 2．应用CCK8法检测小细胞肺癌细胞株H69与其耐多药耐药细胞株H69AR 二者对阿霉素、依托泊甙、顺铂药物敏感性变化。 ll 硕士学位论文 异。 检测基因沉默效果。 5．CCK8法检测ABCG2沉默后H69AR细胞对化疗药物耐药性变化。 结果： 1．CCK8法分析显示耐阿霉素耐药细胞株H