脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43、Cx40磷酸化水平及其磷酸化位点分析.pdfVIP

IIIIIIIIIIIIIIIIIIIillUlllllllI lIIIIII Y21 摘要 摘 要 目的： 心脑血管系统中主要表达和起作用的缝隙连接蛋白为Cx43和Cx40，其磷 酸化在许多心脑血管疾病中扮演着重要角色。本实验在前期研究的基础上，分 析脑血管痉挛中缝隙连接蛋白Cx43、Cx40的磷酸化水平并利用质谱技术筛选出 其磷酸化位点。为更深入研究缝隙连接蛋白Cx43、Cx40磷酸化参与蛛网膜下腔 对CVS有效药物提供靶点。 方法： SD大鼠，麻醉后断头取脑，显微镜下分离脑基底动脉，将其剪成完整的动脉条， 400pmol 型。 发生的张力变化。 集试剂盒富集CVS组和正常组中的磷酸化总蛋白，再利用WesternBlotting技术 分析CVS组和正常组中Cx43、Cx40磷酸化水平的改变。 点。 结果： 力检测发现，ET-1刺激后血管条张力发生明显的改变。 相比，Cx40处于相对较高的的磷酸化水平。 化蛋白表达量发现CVS中磷酸化GJ蛋白的表达主要以Cx40为主。 摘要 4、前期我们研究表明正常脑基底动脉平滑肌层的GJ蛋白主要为Cx40，CVS 后则以Cx43的表达为主，结合本实验结果我们发现：CVS后脑基底动脉平滑肌 中总蛋白的表达主要为Cx43，而磷酸化蛋白的表达则以Cx40为主。 个磷酸化位点和Cx43的4个磷酸化位点。 结论： CVS后这种总蛋白与磷酸化蛋白表达的不一致可能在CVS的病理过程中起 到重要作用。并且筛选出来的Cx40的9个磷酸化位点和Cx43的4个磷酸化位 点可能是导致CVS后GJ功能发生改变的关键，并由此影响到CVS的发生与发 展。 关键词：Cx43；Cx40；磷酸化；磷酸化位点；脑血管痉挛 III Abstract ABSTRACT Objective： In cardio—cerebral-vascular thathavethemain system，thegapjunction proteins andfunctionsareCx43and actacentral expressions Cx40，Whose phosphorylation rolein cardio—cerebral—vasculardiseases．Inthis decidetofind many study,we outthe oftheir and changes levelsscreenouttheir sites．It phosphorylation phosphorylation is to abasicevidenceforthe roleofCx43、Cx40 expectedprovide important in