肺炎链球菌HtrA蛋白PDZ结构域和嗜盐古菌SAMPs蛋白结构与功能研究.pdf

摘要 摘要 本论文主要研究了肺炎链球菌HtrA蛋白PDZ结构域和嗜盐古菌SAMPs 蛋白的溶液结构和功能： (I)HtrA是一类保守的丝氨酸蛋白酶，在真核生物和原核生物的蛋白质质 量控制中都发挥了重要的作用。HtrA蛋白在C端拥有一个可以调节蛋白酶水解 活性的PDZ结构域。在此，我们利用NMR核磁共振的方法解析了肺炎链球菌 的HtrA PDZ结构域的溶液结构。与经典的PDZ结构域一样，肺炎链球菌HtrA 证明了肺炎链球菌HtrA PDZ结构域可以识别具有XXX．YYF．COOHmotif的小 肽。最后根据化学位移扰动和点突变实验，我们对肺炎链球菌HtrAPDZ结构 域与小肽相互作用的界面和参与识别的关键氨基酸进行了研究。肺炎链球菌 I。ItrA PDZ结构域利用其第一个D链和第三个0【螺旋形成的小沟识别小肽底物。 位于结合界面的氨基酸残基主要通过疏水作用与小肽联系；而两者残基侧链之 间形成的氢键对于结合也是非常重要的。与其他HtrAPDZ结构域相比，肺炎 链球菌HtrA PDZ结构域拥有保守的三维结构和相似的底物结合方式；这暗示 了肺炎链球菌HtrA可能拥有同样的激活方法：PDZ结构域识别配体，引起构 象变化，并传递至蛋白酶体结构域，最终降解底物。 (II)蛋白质可以被多种分子或者蛋白修饰。泛素和类泛素蛋白就是其中一 种。真核生物内，泛素和类泛素蛋白在很多进程中发挥了重要的作用，包括蛋 白酶介导的水解，异染色质的重塑，蛋白运输等。Pup是原核生物中第一个蛋 白共价修饰蛋白的例子。与泛素不同，Pup利用脱酰胺酶和谷氨酰胺合成酶参 与共价连接并且拥有一个无序的结构。作为第三类生物形式，古细菌拥有类似 真核生物的蛋白酶体，但其类似泛素的修饰系统还不清楚。近来，嗜盐古菌中 象：一套是有序的，并相似于真核生物内类泛素蛋白的保守的13-grasp结构： 另一套则和Pup一样是无序的。然而，随着盐浓度的增加，无序构象逐渐消失； 但有序构象依然保留在高盐下。此外，通过化学位移扰动实验，我们发现SAMPl 过与PanA和PanB相互作用从而在蛋白酶体介导的蛋白水解途径中发挥重要作 用。 关键词：肺炎链球菌，HtrA，PDZ结构域，核磁共振波潜，嗜盐古菌，蛋白酶 V 摘要 体，SAMPs，泛素。 VI ABSTRACT ABSTRACT and ofHtrAPDZ This onthesolutionstructurefunction reports dissertatio．n from andSAMPsfrom volcanii： domain Haloferax Streptococcspneumpniae ofserine conserved A(HtrA)，ahighly family (I)High—temperaturerequirement crucialin controlin and