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摘要……………………………………………………………………………………………………………………………………………I
英文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅡI
1前言……………………………………………………………………………………………………..1
1.1粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的研究进展………………………………………………….1
1.1.1粒细胞.巨噬细胞刺激因子的来源及产生……………………………………………..1
1.1.2粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子基因特征及其生物学活性…………………………..2
1.1.3粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的作用机制…………………………………………..2
1.1.4粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的免疫佐剂效应……………………………………..3
1.2乳酸菌及其系统研究进展………………………………………………………………………4
1.2.1乳酸菌的益生作用………………………………………………………………………5
1.2.2乳酸菌的免疫原性和佐荆性……………………………………………………………6
1.2.3乳酸菌分泌表达载体的应用……………………………………………………………6
1.2。4乳酸杆菌表达系统的发展前景…………………………………………………………7
1.3研究目的与意义………………………………………………………………………………….8
2材料与方法…………………………………………………………………………………………….9
2.1材料,…………………………………………………………………………………………………………………………………….9
2。1。1病毒与细胞………………………………………………………………………………9
2.1.2质粒、菌种与疫苗………………………………………………………………………9
2.1.3抗1本制剂………………………………………….,.……………………………………………………………….9
2.1.4实验动物………………………………………………………………………………….9
2.1.5引物……………………………………………………………………………………………………………………9
2.1.6主要分子生物学试剂……………………………………………………………………9
2.1.7培养基……………………………………………………………………………………9
2.1.8主要溶液配制…………………………………………………………………………..10
2。1。9主要实验仪器与设备…………………………………………………………………一10
2.2实验方法…………………………………………-………………………………………………11
2.2.t猪粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子基因的获得………………………………………1l
2.2.2
pGM.CSF基因在大肠杆菌中的构建…………………………………………………,13
2.23
pGM.CSF基因在大肠杆菌中的可溶性表达………………………………………….14
2.2.4
pGM.CSF重组干酪乳杆菌表达系统构建……………………………………………..15
2.2.5
pGM.CSF基因在重组干酪乳杆菌中的表达………………………………………….17
2.2.6猪粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的生物学活性检测………………………………18
2.2.7干酪乳杆菌表达pGM.CSF作为免疫佐剂的效果分析……………………………一19
3结果……………………………………………………………………………………………………22
东北农业大学农学硕士学位论文
3.1目的基因pGM.CSF的克隆……………………………………………………………………22
3.1.1
PCR扩增pGM—CSF基因结果…………………………………………………………22
3.2表达pGM.CSF重组大肠杆菌的鉴定结果…………………………………………………一23
3.3pGM.CSF在大肠杆菌中的表达及活性分析…………………………………………………24
3.3.1
SDS.PAGE分析……………………………………………………
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