猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在干酪乳杆菌中表达及生物活性检测.pdf

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摘要……………………………………………………………………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅡI 1前言……………………………………………………………………………………………………..1 1.1粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的研究进展………………………………………………….1 1.1.1粒细胞.巨噬细胞刺激因子的来源及产生……………………………………………..1 1.1.2粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子基因特征及其生物学活性…………………………..2 1.1.3粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的作用机制…………………………………………..2 1.1.4粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的免疫佐剂效应……………………………………..3 1.2乳酸菌及其系统研究进展………………………………………………………………………4 1.2.1乳酸菌的益生作用………………………………………………………………………5 1.2.2乳酸菌的免疫原性和佐荆性……………………………………………………………6 1.2.3乳酸菌分泌表达载体的应用……………………………………………………………6 1.2。4乳酸杆菌表达系统的发展前景…………………………………………………………7 1.3研究目的与意义………………………………………………………………………………….8 2材料与方法…………………………………………………………………………………………….9 2.1材料,…………………………………………………………………………………………………………………………………….9 2。1。1病毒与细胞………………………………………………………………………………9 2.1.2质粒、菌种与疫苗………………………………………………………………………9 2.1.3抗1本制剂………………………………………….,.……………………………………………………………….9 2.1.4实验动物………………………………………………………………………………….9 2.1.5引物……………………………………………………………………………………………………………………9 2.1.6主要分子生物学试剂……………………………………………………………………9 2.1.7培养基……………………………………………………………………………………9 2.1.8主要溶液配制…………………………………………………………………………..10 2。1。9主要实验仪器与设备…………………………………………………………………一10 2.2实验方法…………………………………………-………………………………………………11 2.2.t猪粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子基因的获得………………………………………1l 2.2.2 pGM.CSF基因在大肠杆菌中的构建…………………………………………………,13 2.23 pGM.CSF基因在大肠杆菌中的可溶性表达………………………………………….14 2.2.4 pGM.CSF重组干酪乳杆菌表达系统构建……………………………………………..15 2.2.5 pGM.CSF基因在重组干酪乳杆菌中的表达………………………………………….17 2.2.6猪粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子的生物学活性检测………………………………18 2.2.7干酪乳杆菌表达pGM.CSF作为免疫佐剂的效果分析……………………………一19 3结果……………………………………………………………………………………………………22 东北农业大学农学硕士学位论文 3.1目的基因pGM.CSF的克隆……………………………………………………………………22 3.1.1 PCR扩增pGM—CSF基因结果…………………………………………………………22 3.2表达pGM.CSF重组大肠杆菌的鉴定结果…………………………………………………一23 3.3pGM.CSF在大肠杆菌中的表达及活性分析…………………………………………………24 3.3.1 SDS.PAGE分析……………………………………………………

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