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小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse 西南大学药学院 目的 观察精子在生成过程中形态的改变来检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作用. 原理 精子的成熟和正常形态受多种基因控制，当这些基因中任何一个在化合物的作用下发生突变，就会导致畸形率增高。某些特殊的染色体重排，如性-常染色体易位是精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、变态反应、感染和体温升高也可能导致精子的畸形。 器材与试剂 器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水溶液 试验设计 1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低剂量组。 阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹腔注射，连续５天，每天一次。 操作步骤 处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在较暗的视野下观察） 注意事项 辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感，因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。 * * *
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