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第七章 生物传感技术及其在食品分析中的应用 一、生物传感器概述 二、SPR生物传感器 三、SPR生物传感器 在食品中的应用 一.生物传感器概述什么是传感器? 1. 传感器的概念： 广义上讲—传感器就是能感知外界信息并能按一定规律将这些信息转换成可用信号的装置。 简单地说—传感器是将外界信号转换为电信号的装置。 所以传感器由敏感元器件（感知元件）和转换器件（将敏感元件的输出量转换成适宜传输和测量的量的器件，如电学量）两部分组成；有的半导体敏感元器件可以直接输出电信号，本身就构成传感器。 3、生物传感器的定义 一般定义：使用固定化的生物分子(immobilized biomolecules)结合换能器，用来侦测生物体内或生物体外的环境化学物质或与之起特异性相互作用后产生响应的一种装置。 Gronow定义：一种含有固定化生物物质(如酶、抗体、全细胞、细胞器或其联合体)并与一种合适的换能器紧密结合的分析工具或系统，它可以将生化信号转化为数量化的电信号。 5、生物传感器的特点 (1) 测定范围广泛。 (2)生物传感器使用时一般不需要样品的预处理，样品中的被测组分的分离和检测同时完成，且测定时一般不需加入其它试剂。 (3) 采用固定化生物活性物质作敏感基元（催化剂），价值昂贵的试剂可以重复多次使用。 (4)测定过程简单迅速。 (5) 准确度和灵敏度高。一般相对误差不超过1％。 (6)由于它的体积小，可以实现连续在线监测，容易实现自动分析。 (7) 专一性强，只对特定的底物起反应，而且不受颜色、浊度的影响。 (8)可进入生物体内。 (9)传感器连同测定仪的成本远低于大型的分析仪器，便于推广普及。 7. 生物传感器活性物质的固定化 直接法: 指生物活性物质通过化学方法直接固定在转换器上的一种方法------交联法 间接法:指将生物活性物质先固定在一种固体支撑体上,在安装到转换器上的一种方法------包埋法, 载体结合法 交联法(直接法) 包埋法(间接法) 1.将生物活性分子包埋在凝胶的细微格子里制成固定化。 常用的凝胶有：聚丙烯酰胺、淀粉、明胶、聚乙烯醇、海藻酸钙、硅树脂 适用范围: 宜于作用于小分子底物和产物的生物活性物质 适合于细胞器,微生物的包埋. 2. LB膜型：制作分子水平上的单层或多层纳米分子膜技术(Langmuir-Blodgett，LB膜)。 特点: 膜厚能薄至纳米级 能制备几乎没有缺陷的单分子层膜 3.脂质双层膜:人工制备的细胞膜-----目前处于试验阶段 载体结合法(间接法) 吸附法: 生物活性分子通过极性键、氢键、疏水力或π电子相互作用等吸附于不溶性载体上。 常用的载体有：多孔玻璃、活性炭、氧化铝、石英砂、纤维素酯、葡聚糖、琼脂糖、聚氯乙烯、聚苯乙烯 2. 共价结合法: A 将载体有关基团活化,然后与生物活性物质有关基团发生偶联反应 B 在载体上接上一双功能试剂,然后将生物活性物质偶连上去 常用的载体有：烷基化多孔玻璃、纤维素、胶原、琼脂糖、 9. 生物传感器在食品中的应用 酶生物传感器 葡萄糖，谷氨酸和乳酸生物传感器是我国应用的基本品种 微生物传感器 免疫传感器 组织生物传感器 DNA传感器 10. 生物传感器的发展趋势 二. SPR生物传感器 表面等离子体共振(SPR)生物传感器是在无标记的条件下, 实时监控两个或多个生物分子之间相互作用的一种光学技术-----反射型光化学生物传感器. 近10年来,它的可靠性已得到生命科学领域认可. SPR的发展 1902 年 ， Wood 在光学实验中首次发现了表面等离子体共振现象； 1941 年 ， Fano 提出了体积等离子体的概念，认为是一种纵向波，解释了 SPR 现象； 1957 年 ， Ritchie 认为表面等离子体共振发生与金属薄膜的界面有关， 提出了 Ritche 理论； 1959 年 ， Powell 和 Swan 通过实验证实了 Ritche 的理论； 1971 年 ， Kretschmann 结构为 SPR 传感器奠定了基础； 1982 年 ，英国 Salford 大学 Boardman 教授出版专著 “Electromagnetic Surface Modes” （电磁场表面波模态），标志表面等离子体理论已经完善； 1983年, Liedberg等人成功地研制出了第一个表面等离子体 子气体和生物传感器； 1988 年 ， Benno Rothenhausler Wolfgang Knoll 在《 Nature 》上发表 “Surface-plasmon microscopy”, 标志着 SPR 原理在生物学中开始应用； 1993 年 ， Bia