荧光定量PCR的原理及其应用.pptVIP

荧光定量PCR的原理及其应用 蒋昌龙 荧光定量PCR Outline 荧光定量PCR的原理 荧光定量PCR应用 荧光定量PCR 原理 荧光定量PCR 原理 荧光定量PCR 在体系中引入荧光染料 实时检测 扩增阶段： 指数期 平台期 荧光定量PCR 原理 荧光定量PCR 原理 荧光定量PCR 原理 设定标准品，绘制标准曲线 荧光定量PCR 原理 荧光定量PCR 原理 两种定量方法 绝对定量 标准曲线法 相对定量 双标准曲线法 2 -ΔΔc(t) 法 插入染料法 SYBR Green I 杂交探针法 TaqMan 插入染料方法的原理 退 火 Melting Curve analysis Solve the non-specific product 扩增特异性强 可以做多重检测 成本较高 医疗领域的应用 科学研究方面的应用 公安系统内的应用 动植物检疫 考古学方面的应用 … … 荧光定量PCR 应用 据统计，目前中国有10~15%的人感染有HBV病毒 人工受精前男性HBV检测 患者血清、精液的HBV检测 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 研究方法 荧光定量PCR 应用 研究方法 亚硫酸氢钠处理的血清DNA 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 荧光定量PCR 应用 基因表达水平研究 基因的绝对表达量（微生物检测、环境监测） 标本间基因的差异表达（病理相关、芯片验证） 基因型研究 基因单碱基变化（SNP、mutant） 基因的碱基修饰（甲基化等） We need to decide what to start? 决定实验方案（绝对定量？相对定量？） 实验目的 决定选用实验方法 (SYBR green？TaqMan?) 检测基因数、样本数 成本核算 We need Kits? 医疗方面的部分应用（2）： 遗传病诊断 ： 等位基因检测 多基因遗传病的突变检测 基因表达异常所致遗传病检测 荧光定量PCR 应用 医疗方面的部分应用（3）： 肿瘤诊断 ： 肿瘤相关基因表达的检测 ：包括癌基因抗癌基因、肿瘤转移基因及转移抑制基因 肿瘤标志物 如癌胚抗原、同功酶、抗体、激素、细胞因子、受体等 肿瘤耐药基因（MDR） 荧光定量PCR 应用 研究方面的部分应用（1）： 分子生物学方面： 研究各种处理对细胞mRNA含量变化的影响 比较染病组织与正常组织中各种mRNA含量差异 DNA或RNA的转染量与实验结果关系的研究 荧光定量PCR 应用 研究方面的部分应用（2）： 植物学方面： 转基因植物中基因拷贝数与性状的关系 监测转基因植物中基因拷贝数的变化 转基因植株早期的筛选 监测农作物病虫害抗药性变化 荧光定量PCR 应用 研究方面的部分应用（3）： 动物学方面： 动物疫情监测 新的防止疫情发生及控制的药物及方法的研究 转基因动物中目的基因拷贝数与品质的关系研究及早期筛选 荧光定量PCR 应用 其他方面的部分应用（1）： 进出口检验相关 ： 动物检疫，如各种动物流行病 植物检疫，如各种植物流行病 有害动物，特别是昆虫 食品检测，如各种有害病原微生物，如病毒、细菌、