小鼠桑椹胚的程序化冷冻及玻璃化冷冻-管内解冻.pdfVIP

中文摘要 本研究以小鼠桑椹胚为材料，研究了胚胎的程序化冷冻以及玻璃化冷冻．管内解冻。 程序化冷冻实验：摸索适合小鼠桑椹胚的冷冻液和冷冻降温程序。选取种抗冻剂(乙二醇、 DMSO、甘油)配制4种浓度为10％(v／v)的冷冻液，采用4种冷冻程序对小鼠的胚胎进行冷冻 保存．观察不同的抗冻保护剂和冷冻程序对冷冻效果的影响。结果显示：采用10％的乙二醇作为 冷冻溶液，以程序1冷冻的小鼠桑椹胚解冻后体外囊胚发育率和孵化率与对照组(新鲜胚胎体外 培养)间差异不显著(95．4％VS100％和67．8％VS 76．2％)(Po．05)；程序3用于小鼠桑椹胚的 冷冻效果好，胚胎体外发育情况与对照组无差异(93．3％VS100％and73．3％vs76．2％)(P0．05)。 结论：体积分数为10％的乙二醇和程序l、程序3是适合小鼠桑椹胚冷冻的冷冻液和冷冻程序。 玻璃化冷冻-管内接实验：研究不同的冷冻液和管内解冻时间对玻璃化冷冻胚胎解冻后存活率 的影响，为大家畜冷冻胚胎的移植提供参数。实验方法：利用胚胎冷冻时在管内吸入的解冻液 glycol+Fieoll (0．5mol，L蔗糖溶液)稀释玻璃化冷冻溶液(Ethylene 行体外培养或直接移植给受体，观察胚胎的体内外发育情况。实验结果：以EFS30冷冻保存的胚 胎解冻后体外培养结果表明，3～16min组胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组(新鲜胚胎体外培 VS％100％，64．10／，75．6％VS 养)相比差异不显著(92．30／一98．4 76．2％，PO．05)：以EFS40冷冻 保存的胚胎解冻后体外培养结果表明，3—20rain组胚胎的囊胚发育率与对照组相比差异不显著 (94．2’扣100％VS100‰P0．05)，3-8 rain组胚胎的孵化率与对照组差异不显著(66．2％02．9％ VS 植给假孕受体，妊娠受体产活仔率二者相比无显著性差异(58．3％VS．54．9％，P0．05)。结论； 率，且胚胎移植后的产仔率与鲜胚组无显著性差异。为此推断本方法能够应用于大家畜的胚胎移 植，同时建议EFS30冷冻的胚胎移植操作应当在16min内完成。 j譬自}$孔小鼠桑椹胚程序化冷冻玻璃化管内解冻 Ⅲ Abstract The researchedthe ofmoIlscmoralaeslow and presentstudy cryopresorvation by freezing vitrificationwithin-straw thawing． hthesectionofslow mortdaewasfrozen4 in4 freezing．mOllSe byfreezingprogramspreservative were from to PBS 3 solutions，whichprepared glycol，Dimethyl 10％(v／v)in cryopretectants(Ethylene invitro rateand rateofthe after developmental embryos sulfoxide，Glycer01)．The hatching thawing of