玉米活性细胞分裂素控制相关基因ZmGLU1、ZmCKX1和ZmCKX2启动子的分离与分析.pdfVIP

摘要 启动子是生物体自身基因表达调控的重要元件，也是基因工程表达载体的～个重要元件。从 生物体中分离、研究启动予，不仅可以让人们更深入地了解生物生长发育的分子机理，同时也为 基因上程提供了各种不同功能的启动子，促进基因工程的发展。 细胞分裂素是一类具有与N5一呋喃甲基腺嘌呤相似结构的，能够促进细胞分裂与分化的物质。 植物体内大量存在着无活性的结合态细胞分裂素，有生物活性的只占少部分。因此，植物体内对 于细胞分裂索水平的控制是个非常精细而又重要的过程。玉米体内活性细胞分裂素的水平主要受 活化细胞分裂素的B一葡萄糖苷酶和降解细胞分裂素的细胞分裂素氧化酶控制。因此，分离这两 类基因的启动子并研究它们的表达特性，不仅对于研究玉米的生长发育控制具有重要的理论意 义，也可为植物基因工程提供有潜在应用价值的启动子。 本试验用部分面以删eDNA序列标记探针去筛选玉米基因组文库。经过四轮的筛选得到了7 I和Sal 个阳性克隆，选择其中一个克隆进行酶切分析，回收Xba I双酶切产生的一条约4kb的 阳性片段进行弧克隆和测序。测序结果表明该片段包含1904bp的Z,nGL／J／基因5’侧翼序列。对该 序列进行5’端缺失，得到9条不同长度的片段。将这9个片段插入到真核表达载体pCAWBIA3301 烟草，对转基因烟草植株不同的组织和器官进行GUS组织化学染色和荧光定量检测。结果表明： (1)全长启动子肋(一1677)是个强表达活性的启动子，在大部分器官中的活性是35S启动子的一 半左右。在根中的活性最强，约是35S启动子的3倍。在成熟种子中的活性最低。只有35S启动 子的二十分之一。GUS染色主耍集中在维管组织中。(2)全长启动子D0(一1677)的活性在开花后 lO天内变化不明显，维持很高水平，lO天后活性急剧下降，到35天的时候下降到非常低的水平， 大概是开花期的五十分之一。而随着种子的萌发，启动子活性又很快升高，其中在第3天和第8 天增幅最大．这两个时间段分别是胚根和胚芽的出现时间，萌发11天后的幼苗中GUS活性达到 最高，大约是成熟种子的300倍。(3)全长启动子Do(一1677)不响应冷、涝，早和盐四种逆境， 缺失至一758时，启动子失去根的组织特异性，成为组成型强表达启动子。 5’侧翼2k6序列具有启动子活性，但活性非常 载体上并转化烟草．GUS活性分析表明：Z．mCf．Jr三P 5 弱。ZmC’KXlP7侧翼1．5kb序列具有启动予活性，是ZmCKX2P的10多倍；并且在种子萌发过程 中活性变化不明显。 关键词：玉米，启动子，B一葡萄糖苷酶，细胞分裂素氧化酶，组织特异性，转基因烟草 Abstract Promoterisall elementnot for alsofor important onlyendogeneousgeneexpression，but in arc hormoneswithadenine heterogeneousgeneexpressiongenetic engineering．Cytokininsplant derivativeswhich celldivision promote anddifferentimion．Thelevelofactive in is cytokininplant controlledan and levelofactive straitly by important maize,the complexregulationprocess．In iscontrolled and o