荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体高频率再生.pdfVIP

福建农林大学硕士论文 中文摘要 摘 要 chinensisSoon．)晚熟优良品种。下番枝’，并经筛选得到的11个荔枝转基因抗性 resistant calli，TREC)细胞系为材料，进行 胚性愈伤组织(Transgenicembryogenie 荔枝转基因抗性胚性愈伤组织长期继代保持系统的优化及其gus检测：选择其中 的5个转基因抗性细胞系(Q81 生质体分离和高频率再生培养；采用转基因原生质体来源的愈伤组织进行体胚诱 导，并再生转基因植株。主要研究结果如下： 1．荔枝转基因抗性胚性愈伤组织长期继代保持系统的优化。采用交替培养 基培养荔枝转基因抗性胚性愈伤组织，继代2年，转基因抗性胚性愈伤组织仍然 保持旺盛生长而且GUS表达量稳定。适合的交替培养基为附加1．0mg·L“2,4 一D的MS培养基和附加1．0 2,4--D+50 mg·L。1 mg·L。1潮霉索的MS培养基。 2．荔枝转基因抗性胚性愈伤组织的GUS检测。荔枝转基因抗性胚性愈伤组 织长期继代保持过程中的GUS组织化学检测结果是：抗性细胞系Q811、Q81．535 Q6L161、042一l、Q42-2、N3l、N21则为稳定不表达GUS类型。 3．荔枝转基因抗性胚性愈伤组织原生质体分离条件的优化。荔枝转基因抗 性胚性愈伤组织Q811抗性细胞系原生质体分离条件的适宜条件是：转基因抗性 胚性愈伤组织培养16—18d后，转入含O．8％纤维素酶CelluloseR-10和O．4％离 析酶Macrease r．min1)lO一11 (30--40 h进行酶解。在最适条件下，荔枝转基因原生质体产 10 量达到1．82X7个佗，活力达97．5％。 4．荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体高频率再生体系的建立。以M·2(修改 +250 M葡萄糖和O．1M蔗糖)为培养 mg·L-1谷氨酰胺+50ml·L_1CW(椰乳)+o．45 基，培养密度为3．0X105个／mL，采用海藻酸盐包埋悬浮方式进行暗培养，荔枝 转基因原生质体的分裂频率可高达18．78％，植板率达22．30％，小克隆形成频率 达3．24％。 5．荔枝转基因原生质体再生愈伤组织的GUS检测。转基因原尘质体来源的 5个愈伤组织抗性细胞系中：抗性细胞系PQgll、PQSl．535为大量稳定表达GUS n 福建农林大学硕士论文 中文摘要 类型：PQ9221、PQ9223、PQlOl6均为稳定不表达GUS类型。 6．荔枝转基因原生质体再生愈伤组织的体胚发生。转基因原生质体来源的愈 伤组织以Tl(附加1．O 加O．1 mg·L～ZT、100mg·L_1肌醇、5％蔗糖和1．0％琼脂的 mg·L～NAA、3．5 m1．L‘1椰乳、5％蔗糖和1．0％琼脂的MS培养基)为培 MS培养基)、Tlo(附加50 养基，采用分步培养诱导的方法诱导体胚发生，并再生新植株。 本研究建立的荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体高频率再生体系，对生物技 术在荔枝品种改良的应用有重要意义，也为进行龙眼荔枝属间原生质体融合奠定 了基础。 关键词：荔枝；转基因抗性胚性愈伤组织：转基因原生质体：体细胞胚胎发生 转基因植株 Ill 祸建农林大学硕士论文 英文摘要 of fromLitchi HighFrequencyRegenerationProtoplasts Calli