改良固相BANA试验方法建立及在牙周病变检测中应用.pdfVIP

Y 中文摘要 改良固相BANA试验方法的建立 及在牙周病变检测中的应用 摘 要 目的：牙龈卟啉单胞菌、福赛氏类杆菌、螺旋体是三 种公认的牙周炎重要可疑致病微生物。Loesches研究证实 龈下菌斑中以上三种致病微生物均能产生胰蛋白酶样酶 (研psin．1ikeenzyme，TLE)，胰蛋白酶样酶是牙周组织的 重要破坏因素之一。BANA试验 卟啉单胞菌、齿密螺旋体、福赛氏类杆菌均能产生胰蛋白酶 样酶，可使人工合成的酶底物…苯甲酰精氨酸萘酰胺 检测这三种牙周炎重要可疑致病微生物的方法。本研究以液 相BANA方法为“参照标准，旨在确定改良固相BANA 试验检测方法的最适反应条件，探索改良固相BANA试验 的敏感性、特异性，建立更方便于临床、稳定的固相BANA 试验的技术方案，评价该方法应用于临床的价值，初步探讨 改良固相BANA试验结果与牙周炎主要临床指标之间的关 系。 ! 材料与方法 1细菌的培养 试验菌株选用口腔重要国际标准菌株20株，其中厌氧菌 14株，需氧菌6株，分别进行相应的细菌培养获得细菌悬液， 分别用于固、液相BANA试验。 中文摘要 2临床资料 白求恩国际和平医院口腔科门诊就诊患者，刮取龈下菌 斑标本。共采集龈下菌斑标本(来自龈沟或牙周袋)205份。 3记录临床指数 菌斑指数(PLI)，牙龈指数(GI)，牙周袋最大探诊深 度，牙齿松动度，附着丧失，牙槽骨吸收程度。 4液相BANA试验： 1oO“1待检菌液或菌斑标本进行液相BANA试验 5改良固相BANA试验： 1O“1待检菌液或菌斑标本进行改良固相BANA试验 结果 1改良固相BANA试验最适工作条件确定： 2mM的BANA的为改良固相BANA试验最适工作浓度， 发现最适工作条件为55。C水箱孵育30分钟，在此浓度时可 检测出1．95×1 O。6以上Anson单位的胰蛋白酶。 2两种BANA试验特异性评价 牙龈卟啉单胞菌两种BANA试验呈阳性(++至+++)，黄 褐噬二氧化碳纤维菌、牙龈噬二氧化碳纤维菌、铜绿假单胞 菌为弱阳性(+)；其它14株待检菌株反应阴性(一)。 3两种B心A试验敏感性的比较 测定结果显示当固相法在55℃孵育3O分钟时可检出1．95 ×10乇以上Anson单位的胰蛋白酶；液相法在37℃，孵育过 63×l 夜后可检出1．5 O为以上Anson单位的胰蛋白酶，两种试验 方法的敏感性几乎相同，但固相法更快捷、方便。 当牙龈卟啉单胞菌菌液浓度高于8．O×105时，两种BANA 试验均反应为阳性。 中文摘要 4改良固相BANA试验与液相BANA试验及“临床诊断 标准在慢性牙周炎活动期的诊断符合率。 说明固相BANA与液相BANA试验两种方法在慢性牙周炎 活动期诊断上存在一致性。 ‘ 5健康牙龈组、单纯性牙龈炎组、慢性牙周炎活动期组龈下 菌斑固相BANA试验结果 健康牙龈组、慢性单纯性牙龈炎组、慢性牙周炎活动期 3．3％、 组龈下菌斑固相BANA试验阳性率分别为6％、1 86．67％，经统计学x2检验，尸O．05，差异具有统计学意义。 三组龈下菌斑固相BANA试验结果的分值经Nemenyi 秩和检验进行三组问两两比较，健康组与牙龈炎组间’ 尸O．05，无统计学意义，牙周炎组与健康组和牙龈炎组之 间尸O．05，差异有统计学意义。 6临床指数与龈下菌斑固相色ANA测定值的关系 6．1菌斑指数与龈下菌斑固相BANA试验测定值的关系 不同菌斑指数所对应的固相BANA测定值，经秩和检 验尸O．05，提示不同菌斑指数所对应的龈下菌斑固相 BANA试验测定值，差异有统计学意义。 菌斑指数与龈下菌斑固相BANA测定值的关