荧光标记试剂制备及在高效液相色谱-质谱中应用.pdfVIP

摘要 高效液相色谱(HPLc)因其强大的分离分析能力已被广泛应用于许多研 究和应用领域，如化学、生物化学、I临床医学、药物学、神经生物学及食品 卫生、环保检测、质量控制等。该法也是分析化学中发展最快、应用最广泛 的领域之一。然而，由于样品中被测组分本身性质及其低含量的限制，并非 所有化合物都可直接用于液相色谱分析。荧光检测具有很高的灵敏度，利用 荧光标记技术使本身不发荧光的化合物(如氨基酸、脂肪胺、脂肪酸等)转化 成发射荧光的衍生物，能够实现高灵敏荧光检测。本文重点研究了几种新荧 光标记试剂的合成和表征，考察了荧光标记试剂的光谱性质，优化了衍生反 应条件、色谱分离条件，并将建立的方法应用于不同生物样品的分析中。具 体工作内容如下： 第一章：介绍了荧光原理及荧光标记法。简述了高效液相色谱的发展及 其基础知识。综述了荧光标记试剂在羧酸类和氨基类化合物的高效液相色谱 分析中的应用。 第二章：五种荧光标记试剂：吖啶酮．9．乙基对甲苯磺酸酯(AETs)、 晶体结构解析。 色谱一质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了脂肪酸的 柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法，并将方法应用于土壤、苔藓、阿拉斯 加深海鱼油、川西獐牙菜、肋柱花、麻花艽、秦艽样品的测定，实现了这些 样品中脂肪酸的高灵敏检测。考察了溶液中的环境因素如溶剂极性、温度、 卤素离子、重金属离子对TSPP．c8衍生物荧光光谱的影响。’ 色谱一质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了脂肪胺的 柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法，并将方法应用于土壤、酸奶、大鼠端 脑、造纸厂废水实际样品的测定。结果表明，衍生反应条件温和，衍生产率 高，该方法的线性范围宽，重现性好，灵敏度高。 神经递质的高效液相色谱。质谱分析。建立了BCEOC用于五种神经递质的荧 光标记液相色谱分析法，实现了氨基酸类神经递质和含有一级胺与二级胺的 单胺类神经递质的同时标记，对大鼠端脑中的神经递质实现了准确测定。采 用二十种氨基酸的BCEOC柱前衍生荧光检测法实现了大鼠血浆、麻花艽、 秦艽中氨基酸的测定。 关键词：高效液相色谱，质谱，荧光标记试剂，柱前衍生，脂肪 酸，脂肪胺，神经递质，氨基酸 Abstract toits liquid po、Ⅳedhl Hi曲perfornlance been aIld in fields entllllsiasticallywidelyadoptedmally sepamtionc印aci吼has 0fsciemmcresearch as and印plication，such scienceand most llsedme也odsin f瓠test a11dthe isalsooneoftlle deveIopiIlg wideIy tobe all aresuitable directly compounds aIlal舛calchemist阱Ho、vevernot ofthe andⅡle HPLCbecauseof也e1imi诅tion a11alyz