急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞动物模型的建立.doc

 学位论文原创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文 中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或 撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以 明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。  作者签名：  日期：  年  月  日  学位论文使用授权声明 本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和 借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部 门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分 内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。  作者签名：  导师签名：  日期：  年  月  日  日期：  年  月 汕头大学医学院硕士学位论文 中文摘要 背景及目的 急性 T 淋巴细胞白血病（T-acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）是 T 淋巴细胞发生 克隆性异常增殖所致的恶性疾病，在儿童的急性淋巴细胞白血病中占 15%，成人的急性 淋巴细胞白血病中占 25%。其病因尚不明确，但研究者发现 NOTCH1、FBXW7、FLT3、 BCL11B、PTPN2、PHF6、WT1、NRAS、CDKN2A、和 IL7R 参与 T-ALL 发病。与 B-ALL （B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL）相比，T-ALL 起病时白细胞较高，病情进展迅 速，易发生纵膈肿瘤及中枢神经系统浸润、易复发且预后不良。主要表达了 T 细胞表面 的抗原：CD2、cCD3、CD5、CD7、TdT 阳性。T-ALL 具有代表特征的染色体异常包括 T 细胞受体基因和多种转录因子异常。大部分 T-ALL 存在 NOTCH1 或 FBXW7 突变，它导 致 NOTCH1 通路激活或稳定。尽管治疗取得明显进步，T-ALL 患者中仅 70%-80%儿童患 者和 40%成人患者长期缓解。T-ALL 预后差主要在于对其生物学了解不足，从而不能通 过识别可靠的预后因素调整治疗方案。而对 T-ALL 生物学了解过少，除其内在的异质性 外，还与 T-ALL 发生率低，供研究的患者相对少有关。 人 T 淋巴细胞系 Jurkat 细胞最初来源于一名 14 岁 T-ALL 初次复发的男性患者。Jurkat 细胞免疫表型：CD2+、CD3+、CD4+、CD6+、CD7+、CD8-、CD19-、CD34+、TCRα/β+、 TCRγ/δ-。Jurkat 细胞是亚四倍体，细胞遗传学特点：87(78-91) 4nXX, -Y, -Y, -5, -16, -17, -22, (2)(p21)/del(2)(p23)x2, der(5)t(5;10)(q11;p15), del(9)(p11)。针对上述免疫学和细胞遗传 学的特点，对研究急性 T 淋巴细胞白血病的发病机制及治疗具有重要意义。Jurkat 细胞广 泛用于体外抗肿瘤药物的筛选，而用 Jurkat 细胞建立动物模型则少有报道。 重度联合免疫缺陷（Severe combined immunodeficiency disease,SCID）小鼠由于缺乏 功能性 T、B 细胞，易于同种或异基因器官移植。与裸鼠不同，SCID 小鼠在移植人白血 病细胞后表现为全身性生长，极似人类白血病的临床表现。本研究中将人 T 淋巴细胞系 Jurkat 细胞静脉注射至 SCID 小鼠体内，探讨 Jurkat 细胞在 SCID 小鼠体内的生物学行为。 材料和方法 1. 用含 10%胎牛血清的 RPMI 1640 培养基于 37℃、5%CO 2 培养器中培养人 T 淋巴 细胞系 Jurkat 细胞。采用对数生长期细胞做动物体内移植。 V 汕头大学医学院硕士学位论文 2. 雌性 SCID 小鼠，5 周龄，北京联合维通利华公司提供。SCID 小鼠饲养于 SPF 环 境。 3. 连续 2d 腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX) 2mg/只，每天注射 1 次，第 3 天取对数生长期 Jurkat 细胞经尾静脉植入，一次性注射 5×106 个/鼠。接种前和接种后 1 周、2 周、3 周、4 周或病程后期分别取尾静脉血计数白细胞总数，并制备血涂片，经瑞 氏染色，油镜下分类、计数。取骨髓直接涂片瑞氏染色后光镜下观察。  结  果  1.  SCID 小鼠在接种 Jurkat 细胞 4 周左右出现白血病症状，表现为食欲减退、皮毛  起皱、萎靡少动、嗜睡、侧偏或弓背、体重减轻等。  2.  SCID 小鼠接种 Jurka