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88 • 实验研究 • July 2012, Vol.10, No.20 Guide of China Medicine 图1 每步纯化结果电泳图谱 图2 亲和层 图3反相层析图谱 图4 阳离子层析图谱 图5 rhPTH （1-34 ）原液纯度图谱 图中泳道1-8分别为Marker 、发酵菌体、破 析图谱 （HPLC方法） 菌上清、亲和层析、酶切、阴离子层析、反 相层析和阳离子层析后样品 4 （1-34 ）原液样品纯度在98% 以上。层析图谱见图4 。各步柱层析及酶 98% 以上，比活性在1.0 ×10 U/mg左右，每批得到原液样品约950mg 切后目的蛋白样品SDS结果见图1，纯化结果见表1。③rhPTH 左右。 （1-34 ）原液纯度测定。用HPLC方法进行测定，原液样品纯度为 通过多次重复验证，我们用该纯化工艺都得到相同的结果。为将 100% （见图5 ）。④生物学活性测定。用UMR-106-01细胞株/RIA法测 来满足临床需要，进行大规模生产rhPTH （1-34 ）奠定了良好的基础。 4 参考文献 定，原液样品比活性为1.05 ×10 U/mg ，与WHO活性标准品相当。 3 讨 论 [1] 张仁怀,杨立明,杨勇,等.含有人甲状旁腺素1-34 的融合蛋白及 我们在构建工程菌时，采用pET （32a+ ）质粒作为rhPTH （1-34 ） 其表达载体[P].中国专利:Zl2006 1 0070995.4. 基因载体，其表达产物是含有一段亲水性的硫氧化蛋白的可溶性融合 [2] Borba VZ,Macas NC.The use ofPTH in the treatment ofosteo- 蛋白，并且在硫氧化蛋白和目的蛋白之间加入了肠激酶的酶切位点。 porosis[J].Arq Bras EndocrinolMetabol,2010,54(2):2 13-2 19. 因此我们将菌体裂解后，经过镍离子亲和层析、酶切、阴离子层析、 [3] Tregear GW,Van Rietschoten J,Greene E,et al.Bovine parathyroid 反相层析和阳离子层析，经过多次摸索研究，最后每步纯化的详细工 hormone:minimum chain length of synthetic peptide required for [3] 艺参数 。在此工艺规模基础上得到rhPTH （1-34 ）原液样品纯度在 biologicalactivity[J].Endocrinology,1973,93(6):1349-1353. 长白山红景天有效成分对X射线辐射防护作用的研究 1 2 1 1 1 1 1 张茗昱 张 建 李 雪 胡冬梅 栾杭琪 张 双 曲保忠 * （1 吉林医药学院口腔影像系，吉林吉林 132013 ；2 解放军空军93062部队卫生队，吉林吉林 132