蛋白质的性质和纯化.pptVIP

第二章 蛋白质 酚试剂（Folin-酚试剂）反应 蛋白质分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。这一反应常用来定量测定蛋白质含量。可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定. 由于蛋白质多肽链两端有游离的?-NH2和?-COOH，所以蛋白质也可以和茚三酮发生反应。 考马斯亮兰(Coomassie brilliant blue G-250 ) 与蛋白质反应形成蓝色透明物质， 在595nm下进行比色。 6.2 目标蛋白质的分离纯化程序 （1）前处理（Pretreatment）细胞破碎，蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来。 （2）粗分级（Rough fractionation） 当蛋白质混合物的提取液获得后，选用一套适当分离纯化方法，使目的蛋白与大量的杂蛋白分离开。 （3）细分级（Fine fractionation） 是将样品进一步提纯的过程。样品经粗分级以后，一般体积较小，杂蛋白已经大部分被除去。 （4）结晶（Crystal）由于结晶中从未发现过变性蛋白质，因此蛋白质的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。蛋白质纯度愈高，溶液愈浓就愈容易结晶。 因此，在目标蛋白质的整个分离纯化过程