GDNF基因治疗大鼠脊髓损伤实验研究.pdfVIP

GDNF基因治疗大鼠脊髓损伤的实验研究 GDNFGene for Cord TherapySpinalInjury： An Experimental Study 本研究通过克隆大鼠GDNF cDNA，并将其与真核表达载体pEGFP—C3相连 接，在国内外首次构建了大鼠在体转基因重组质粒pEGFP—GDNF，利用EGFP 的发光性，为GDNF基因转染后在活体细胞中表达的动态观察建立了新的报告 ， 基因。／借助多价阳离子脂质体DC．Chol介导，在国内外首次成功的将 L pEGFP．GDNF基因导入正常大鼠中胸段脊髓组织中并得到良好表达。由于GDNF 的N端缺失l 1个氨基酸残基后并不影响GDNF的神经营养活性。本实验设计将 EGFP基因融合在GDNF基因的5’端，并且两者之间以编码柔软肽段的核苷酸 连接以保持EGFP与GDNF各自的活性。这样既保留了GDNF蛋白的神经营养 活性，又能通过EGFP观察GDNF蛋白在体内的表达。本研究首次发现在大鼠 急性脊髓重度压迫损伤后经蛛网膜下腔局部给予GDNF蛋白10¨g／日能减少胶质 细胞增生，促进脊髓损伤区大鼠皮质脊髓柬轴突再生和神经骨架蛋白的修复，并 能有效促进损伤大鼠后肢运动功能的早期恢复。应用脂质体介导体内基因转染法 将GDNF基因导入脊髓损伤大鼠伤区，l周后发现GDNF基因在损伤区脊髓组 、／、，一 织中在转录和蛋白水平均有表达。j首次观察到GDNF体内转染能减少脊髓损伤 ／ 区前角运动神经元死亡的数目，降低脊髓前角运动神经元中胆碱酯酶及酸性磷酸 酶变化的幅度，显著减少损伤区轴突丧失并促进近端皮质脊髓束再生并通过损伤 区，且能有效地促进SCl大鼠后肢运动功能恢复。本研究为将来观察其它神经营 养因子对脊髓损伤治疗作用建立了良好的基因治疗方法。 关键词：胶质细胞源性神经营养因子x；／脊髓损彬基因治彩阳离子脂质毹7转 染；轴突再彤功能 l英文壤霹裹 l主要英文缩写表 GDNF 胶质细胞源性神经营养因子 SCI 脊髓损伤 NTF 神经营养家族 SAL 生理盐水 NGF {孛经营莠因子 ACP 酸性磷酸酶 C}{S 艟谶赘酶 嚣GFP 瑁强登绿色荧光蛋白 DC．Choi 二甲氨基乙醇专§基甲酰膳固醇 HRP 辣根过氧化物醇 GFAP 胶质原纤维酸性蛋白 NF 神经微丝 RT—PCR 逆转录聚台酶键反应 TMB 四甲基联苯胺 CSM 皮质脊髓裘 GFR谨 GDNF受钵a驻基、 CNS 中枢神经系绕 HL