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邮mPCR检测马立克氏病病毒gL、班和朋叼基因
mRNA方法的建立
摘 要
马立克氏病病毒I型(MDV-1)在鸡体内的感染分为四个期：早期溶
细胞感染期(earlycyt01ytic
(seconda珂cnolyticinfection)和肿瘤形成期(developmentofmmors)。不
种囊膜蛋白，在溶细胞期大量表达，而在潜伏期极少表达；m叼(Marek’s
历以IQ)是MDV．1特有的致瘤基因之一，主要在潜伏期表达。因此，．gL、
百和所叼基因的mRNA转录水平可以作为判断MDV感染期的指标。
因子的表达，具有抗细胞凋亡的作用。这些研究成果证明，mdv．miRNA与
肿瘤的发生存在着密切关系，肿瘤特异性和组织特异性的miIⅢA表达谱可
作为细胞转化的重要生物学指标。为了研究不同毒力MDV编码的IniRNAs
百和m叼基因训}ⅢA的荧光定量PCR(quantitative
为识别病毒溶细胞期和潜伏期的指标提供工具。
参照已发表的资料而设计的引物，以感染wMDV广西分离株
增出包含gL、甜、历叼以及内参基因3．磷酸甘油醛脱氢酶
(glyceraldehyde一3一phosphate
后连接p例_-戤体，转化大肠杆菌后，筛选阳性克隆，增菌抽提质粒。通
p伽．-二G4刷娟重组质粒，可作为下一步构建标准曲线用的标准品使用。
利用Primer
因序列的保守区域设计了4对特异性引物，用于构建qRT-PCR标准曲线和
样品检测。以10倍梯度浓度的gL、硝、朋叼和G么脚基因重组质粒标准
Green
品DNA为模板进行SYBR
I法qPCR反应，建立了相应的标准曲线
及其直线回归方程。在该反应体系和反应条件下，4条标准曲线的灵敏度达
好的线性关系，相关系数(R2)均超过0．98。结果表明，已成功建立了检
化的qImPCR标准曲线。
本课题成功建立了用于检测gL、对和聊叼基因mRNA转录水平差异的
不同毒力株的miIⅢA在肿瘤组织中的表达差异提供了工具，同时本方法也
可用于鉴定MDV分离毒株的毒力。
关键词：马立克氏病 潜伏期 miIⅢA
gL基因百基因 m叼基因
G么肋H基因实时定量PCR
II
DEVELOPMENTOF ASSAYFORTHE
qRT-PCR
DETECTIoNSoFmRNAOFMAREK’SDISEASEVIRUS
GENES驰，鲥and胁叼
ABSTRACT
The of
infectionwith MDVcanbedividedintofour
patllogenesis oncogenic
The infection The
phases：1eadyc舛olytic phage；2latency
phage；3Seconda巧
The oftumors．Theonsetof show
c吼01yticinfection：4development latency
di仃erencesbetⅣeendi虢rentvimlentMDVstrains．Onsetof
significant 1atency
st砒sat6～8 chickeninfectedwithVMD
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