等温扩增检测HBV+S基因方法建立及临床应用初步研究.pdf

等温扩增检测HBVS基因方法的建立 及临床应用的初步研究 摘要 因输入含有病毒的血液或血液制品而感染的艾滋病、乙肝、丙肝等疾病的现 象，己引起社会的高度重视。目前最主要的任务就是严格控制对外来血源的簿查， 传统的ELISA方法检测血液传播疾病的方法仍在不同方面存在局限性，如检测 通量低、耗时长、灵敏度较低等。而荧光定量PCR法检测也存在着检测成本高、 对设备要求高等缺点，不利于在基层血站及医院维广。本研究采用等温扩增技术， 应用生物素一链亲和素系统富集靶序列，目的在于建立一种灵敏度高、特异性强 的检测低拷贝数核酸样本的方法．。 本研究由HBV S基因的表达载体GSIl5．pFICZS酵母细胞中提取酵母总 RNA。使用偶联有捕获探针的链亲和素磁粒，通过亲和素．链生物素反应，与靶 核苷酸相连，富集样品中的HBVS基因的的mRNA。以等温扩增技术扩增HBV S基因mRNA。扩增产物由1．5％琼脂糖凝胶电泳检测。通过优化等温扩增体系， 该技术检测HBVS基因mRNA的扩增倍数可达108数量级、灵敏度可达到 2pg／mL，高于逆转录PCR200pg／mL的灵敏度。 应用该研究所建立的磁粒富集靶序列和等温扩增技术，选取经荧光定量 PCR分析HBVDNA含量大于1．0×103拷贝／mL的血清标本，进行HBV DNA的检测，结果对于HBV的检测及HBV的分子生物学、分子流行病学研 究有重要的意义。 等温扩增反应体系在HBVS基因mRNA及血清标本中HBVDNA的检测过 程中具有良好的灵敏度、特异性。不仅能够有效检测HBVS基因mRNA及血清 标本中的HBVDNA,而且对于其它低拷贝数的核酸样本的检测同样具有重要价 值和意义。该技术有潜力取代PCR技术，成为核酸样本扩增的主要手段。 关键词：HBVS基因mRNAHBVDNA磁粒等温扩增 Isothermal ofRNAandits amplification application inclinical samples Abstract of bloodtransfusion HIV，HBV,HCV Nowadays,thephenomenoninfecting by face is much the most taskwe and attention prevalentpayed by society．Theimportant stillhasits isto controlblood ELISA strictly screening．Convcntinnallimits，eg： andlow RealtimePCRis sensitivity．The expensive low—throughput,time—wasting and this was research,isothermalused, specialequipments．In amplification requires combinedwith