粗毛栓菌atp9基因克隆、原核表达及进化分析.pdfVIP

png川师范大学硕士论文 粗毛栓菌atp9基因的克隆、原核表达 及进化分析 生物化学与分子生物学 专业 研究生 司文洁 指导教师 王一丁 雍彬 摘要：粗毛栓菌作为一种白腐真菌，可以有效地降解自然界中广泛存在的 木质素，在环境保护和资源再生领域都有着相当广泛的应用前景。在生物 体内，ATP合酶是能量代谢的关键酶，参与生命体中的多种光合磷酸化以 及氧化磷酸化反应。其中atp9基因的功能是负责编码ATP合酶A亚基上 的第9亚单位，是编码ATP合酶基因的重要组成部分，这部分基因片段的 功能与呼吸作用和光合作用有相当密切的关联。由于atp9基因在进化过 程中高度保守，本研究根据已知近缘真菌的基因序列，设计并合成了一对 引物，由粗毛栓菌的mRNA反转录从而得到cDNA，以此第一链作为模板， 利用PCR技术得到粗毛栓菌的编码部分ATP合酶的atp9基因的完整序列， 并将其连接于已处理好的原核表达载体上。此后进行了一系列的测序与进 化分析的结果表明：该克隆片段全长222个碱基对，一共编码了73个氨 基酸，其翻译的蛋白质的分子量为7．35kD。转化大肠杆菌后经IPTG(异 丙基硫代半乳糖苷)诱导，能够快速且高效地表达所需的外源融合蛋白， 其产物的分子量大小与预测结果对比一致。经过同源比对和进化树分析， perniciosa和 该克隆基因编码的氨基酸序列与拉丁名为Crinipellis Trametes strainATCC cingulata 26747’的可可丛枝病菌、瓣环栓菌的 相似度最高。本实验为未来进一步研究粗毛栓菌atp9基因和其编码的蛋 白功能以及阐释其调控和作用机制奠定了基础。 关键词：atp9基因；原核表达；进化分析；粗毛栓菌 四川师范大学硕士论文 and oftheninth prokaryoticexpression Cloning，sequenceanalysis A unitinrra伍etes ofATP subunit gallica part synthase geneatp9 andmolecular Biology Major：Biochemistry Candidate：Si MasterofScience Wen-jieSupervisor：WangYi—ding Bin Yong awhiterot licaisabletoproduce Abstract：As fungus，Trametesgal andthus much in andsecrete enzymes degradelignin ligninolytic ion inthefield a broadicat nature．Therearevery appl