基质金属蛋白酶-2及其组织抑制剂与大肠癌侵袭和转移的关系研究.pdf

中文摘要 基质金属蛋白酶一2及其组织抑制剂与大肠癌 侵袭和转移的关系研究 摘 要 目的：大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，恶性 程度较高，发病率有逐年上升的趋势。尽管治疗手段有了很 大的进步，但五年生存率仍然较低。肿瘤的侵袭和转移是患 者死亡的主要原因之一，因而，针对大肠癌侵袭和转移机制 的研究已经成为热点。大量研究显示，细胞外基质 matrix (extracellularECM)的降解是肿瘤侵袭和转移过程中 关键的一步。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases M]VIP$)是体内较为重要的一类蛋白水解酶，几乎能降解 ECM中的所有成分，Mh但s通过降解ECM中的蛋白来调节 肿瘤细胞的各种生物学行为如侵袭和转移等。国外研究也表 明多种肿瘤组织中存在MMPs的高表达和高活性现象。体内 还存在天然的组织金属蛋白酶抑制剂(nMPs)，可以抑制所 有MMPs的活性，影响肿瘤的侵袭和转移等过程。我们以往 研究发现，大肠癌组织中含有较多的MMP．2。然而，目前对 于大肠癌中MMP．2的病理生理学意义以及与TIMP．2之间的 blot分析和 关系研究较少。本研究采用明胶酶图、Western 免疫组化三种方法对大肠癌患者手术切除标本中MMP．2和 TIMP．2的表达情况进行了研究，探讨了MMP．2和TIMP．2 在大肠癌中的表达特点、相互关系以及与大肠癌进展的相关 性，试图为大肠癌的临床治疗以及判断预后提供有价值的参 考指标。 中文摘要 方法： 1材料：选取河北医科大学第四临床医院外二科2002 年3～7月间住院行外科手术治疗的大肠癌患者25例，分别 取其肿瘤组织与相应正常组织，正常组织距肿瘤边缘至少10 厘米。所有标本均经术后病理证实。标本均于离体半小时内 采集，置．70℃冰箱内保存。 2MMP-2活性的测定：采用明胶一酶图法检测正常及大 肠癌组织中MMP-2的活性，上样量为每孔100p g蛋白。以 明胶降解所形成的透明区带的亮度表示MMP．2的活性。将 结果输入计算机，用Kodak1D凝胶数码成像分析系统软件 对结果进行定量分析。 3MMP．2及TIMP．2的Western blot分析：将正常及大肠 u 癌组织于冰浴下匀浆，离心分离上清，蛋白定量后取150g 蛋白样品进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，电转移至硝酸纤 维素膜上。将印迹膜置于封闭液中封闭，随后与一抗(兔抗 人MMP一2及TIMP一2多克隆抗体)及二抗反应，显色液显色。 用数码成像分析系统软件对结果进行定量分析。 4免疫组化染色：免疫组化采用SABC法，按试剂盒说 明进行操作。用l：200稀释的兔抗人MMP．2和TIMP．2抗体， 检测正常组织及大肠癌组织中MMP-2和TIMP．2的表达与分 布情况。以镜下出现棕黄色颗粒为阳性染色。 结果： 1MMP．2活性：对明胶酶图结果进行分析证实，实验所 用标本中含有的明胶酶主要为MMP一2，包括酶原型MMP一2 和活性型MMP．2两种形式。正常及大肠癌组织中均可检测 到MMP-2的活性，大肠癌组织中酶原型MMP．2和活性型 中文摘要 MMP．2均明显高于正常组织，差异具有显著性(P0．叭)； 侵及浆膜或周围软组织的大肠癌组织中酶原型MMP一2和活 性型MMP．2均显著高于侵及肌层者(P0．05)；伴淋巴结 转移的大肠癌组织中酶原型MMP．2和活性型MMP．2均明显 高于无淋巴结转移者(P0。01)；随着肿瘤Dukes分期的进 展，酶原型MMP．2和活性型MMP．2的活性均呈逐渐升高趋 势。 2MMP一2及TIMP．2的Westernblot分析：大肠癌组织 中MMP