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中文摘要
前 言
哺乳动物细胞的繁殖与生长是一个被精细调节的过程。在细胞生长的
过程中80%的能量将会消耗在细胞核糖体的生物合成上;为了繁殖的继续
进行,遗传物质必须被平均分配到两个子细胞中,此时细胞大部分的能量被
用在遗传物质的保护和分离上,合成代谢的水平很低。虽然分裂过程中细
胞合成代谢相对被抑制的机制还没有得到阐明,但目前研究认为Cdc2和
P”S6K参与了这个精密的过程。
MPF(M Factor)是细胞分裂的中心调控因子,由催化亚
phasePromoting
基Cdc2和调节亚基周期索B(cyclin
位,具有丝/苏氨酸蛋白激酶活性。作为cyclin依赖激酶,Cdc2的激酶活性
在很大程度上抑制了细胞的合成代谢,使细胞的蛋白合成进入了一个相对
的静止期,而细胞主要的能量则被应用于细胞分裂时的染色体的浓缩、核膜
B
的降解、纺锤体的形成等。Cdc2的活性调节机制有两种,一是与受cyclin
结合的情况;其次就是它自身多种氨基酸残基的磷酸化状态.其中当Tyrl5
处于磷酸化状态时,MPF无活性,从而抑制G2/M的转换。最新研究表明
TOP
的mRNAs的翻译。
关于P”S6K的研究主要集中在细胞生长的调控方面,很多年来真核生
S6K是一种信号传导的末梢激酶。目前认为P”S6K是通过磷酸化核糖体
7
S6蛋白质调节具有5 tractattheir5tran.
TOP的mRNAs(oligopyrimidine
start
scriptionalsite)的翻译来调控细胞生长。Cdc2在细胞分裂的过程中可
以通过抑制P”S6K来减弱具有5
TOP的mRNAs的翻译,进而抑制合成代
谢。
繁殖与生长,但在生殖细胞发育减数分裂过程中,关于Cdc2与P70S6K的生
理作用和相互关系还尚未明确。为此我们研究了雄性小鼠在不同发育阶段
Cdc2与pTOS6K在生殖细胞减数分裂的调控作用及相关性。
实验材料与方法
1.实验材料
1.1实验动物雄性昆明系小鼠由中国医科大学实验动物部提供
1.2 Western
Blot相关试剂
1.3组合酶
1.4酶活性检测相关试剂
1.5免疫组化相关试剂
2.实验方法
2.1 应用朱培元等和Bellve等方法分离小鼠睾丸组织生殖细胞的并
作改良。
2.2应用免疫组化方法检测Cdc2
况及P”S6K的细胞分布。
2.3应用Western
达情况。
2.4应用Kinase
性。
实验结果
1.Cdc2在精原细胞、初级精母细胞及精子细胞中的胞浆与胞核中均有
表达,精子中也有所表达,但相对淡染.。
2.Cdc2
Tyrl5的磷酸化情况在10天龄的小鼠睾丸组织中元着色,随着
鼠龄增加,生殖细胞染色明显增强。
3.P70S6K主要在精母细胞、精子细胞及精子中有所表达,在不同发育
阶段细胞内的分布不同。
显。
5.Kinase
Assay显示随着小鼠天龄的增加,r,70S6K的活性逐渐上升。
..
讨 论
一、生精过程中Cdc2的蛋白和活性变化
Cdc2在lO天龄初级精母细胞中已经开始表达,但表达量并不多,
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