脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控及对肿瘤坏死因子表达的影响.pdf

中文摘要 前 言 腹膜透析(peritonealdialysis，PD)是利用腹膜这一半透膜作为滤过膜， 通过腹膜毛细血管内血液和腹腔内透析液进行水和溶质的交换，达到清除 多余水份和代谢废物的目的，是一体化肾脏替代治疗不可缺少的部分。腹 膜透析相关性腹膜炎作为其重要的并发症之一，如果不能很好的控制，最终 会引起腹膜透析失败。 腹膜透析相关性腹膜炎引起的腹膜损害就功能而言，主要表现为水清 除障碍，即腹膜透析失超滤，又称超滤衰竭(ultrafiltration 吸收，跨膜渗透压梯度早期消失；IT型为腹膜通透性与面积乘积值降低；Ⅲ 型为腹腔的反超滤较高，跨毛细血管超滤能力处于平均水平；Ⅳ型为腹膜水 通道蛋白异常。早期腹膜透析相关性腹膜炎主要表现为I型超滤衰竭。本 文所研究的己糖激酶和肿瘤坏死因子均参与了UF的病理生理过程。 mesothelial cells，PMCs)中 以往的研究证明HKs在腹膜间皮细胞(peritoneal 有较高的活性，并在I型超滤衰竭中发挥了重要的作用。那么HKs在腹膜 透析相关性腹膜炎中是否扮演了同样的角色呢?本实验即是研究脂多糖 利用的影响，从而阐明腹膜透析相关性腹膜炎引起腹膜透析失超滤的部分 机制。 necrosis 肿瘤坏死因子(tumor 坏死因子t3。脂多糖是TNF生成的强刺激因素。目前的研究集中于 TNFa，并提示TNFa参与了许多病理和生理过程。腹透流出液中的炎症因 见报道。本文从这个角度来阐明腹膜透析相关性腹膜炎对腹膜的损伤作用 以及PMCs在其中所发挥的重要作用。 实验材料 1．实验用细胞：雄性SD大鼠腹膜问皮细胞，L929细胞株(小鼠成纤维 细胞) 2．细胞培养的相关试剂 3．脂多糖 4．检测己糖激酶活性及Glc含量的相关试剂 5．检测肿瘤坏死因子活性的相关试剂 实验方法 1．胰蛋白酶消化法进行大鼠PMCs的原代培养及传代； 活性的调节作用； 3．比色法检测细胞培养液中葡萄糖减少的量，观察PMCs对Glc的净 利用力； 调控作用。 5．统计学方法 双因素交互作用分析采用SAS 6．12医用统计软件进行处理。其余数 据采用SPSSl0．0医用统计软件进行处理。各组问差异比较采用单因素方 差分析和t检验。P0．05有统计学意义，即差异有显著性。 实验结果 ·2· P0．01)。 随时间延长，葡萄糖的净利用逐渐增大，24小时对葡萄糖的消耗最大。 的变化趋势相似，但线性相关分析提示两者无相关关系(r=0．253，P= 0．582)。 5．LPS诱导PMCs表达TNF(P0．05)。 小时和6小时有明显的下降(P0．05)。 讨 论 腹膜透析患者由于其全身及腹腔局部的免疫防御机能的下降，极易并 发腹膜炎，并且一旦发生腹膜透析相关性腹膜炎，炎症会相对严重且不易控 制。因此迄今腹膜透析相关性腹膜炎仍是腹膜透析发病率高，危害性极大 的并发症之一。腹膜透析相关性腹膜炎对腹膜的损害很大，其突出的临床 表现就是腹膜通透性增加、葡萄糖的吸收加快，导致超滤下降，甚至腹膜透 析失超滤。 目前的研究表明葡萄糖的摄取与己糖激酶有关。HKs可将经葡萄糖转 运体(glucose 糖，这一步是限速酶促不可逆反应。该反应一方面保证了细胞内外Gle的 浓度梯度，使其连续不断地进入细胞内；同时也为Glc进入其他代谢途径提 供了共同底物(6一磷酸葡萄糖)。我们以往的实验也证明腹膜间皮细胞能 表达HKs，HKs活性上调促进了Glc的净利用，从而导致腹膜透析失超滤。 -3- 本实验