冬凌草组织培养、毛状根诱导和离子束处理冬凌草种子当代效应初探.pdf

摘要 - 1 - 摘要 摘 要 冬凌草 Rabdosia Rubescens(Hcnsi)Hara 又名冰凌草,属唇形科香茶菜属，多 年生草本或亚灌木植物，主要分部在我国河南、四川、安徽等中西部地区。以地上 部分入药，据分析，其主要内含物为冰凌草甲素、乙素、丙素和丁素，其中冰凌草 甲素和乙素有明显的杀菌作用，为其有效抗肿瘤成分，对多种癌病均有一定疗效， 被誉为 “中药里的盘尼西林”。此外，冬凌草还具有水土保持和园林观赏作用[1-2] 。 近年来由于乱砍滥伐造成了野生冬凌草资源的匮乏。 本课题运用植物组织培养技术，毛状根诱导技术和离子束处理技术，结合正交 实验、薄层层析法和高效液相色谱法等，考察了不同激素配比对冬凌草组培苗生长 和愈伤组织诱导的影响；利用发根农杆菌 A4 感染冬凌草叶片诱导其产生毛状根；并 对冬凌草种子进行离子束辐照，研究不同剂量的离子束照射对冬凌草组培苗生长和 冬凌草甲素含量的影响。通过研究得出如下结果： 1. 以 MS 为基本培养基，运用正交设计方法，利用植物组织、细胞培养技术， 成功地建立了冬凌草的组织培养快繁技术体系。研究出：不定芽诱导的最适培养基 为 MS ＋0.2 mg·L-1 IBA ＋0.1 mg·L-1 6-BA ＋0.2 mg·L-1 NAA ；生根培养基为 1/2 MS + 1 mg·L-1 IBA + 1 g·L-1 活性炭；以冬凌草茎段为外植体诱导愈伤最佳培养基为 MS + -1 -1 1.5 mg·L 6-BA + 2 mg·L 2,4-D。 4 2.利用发根农杆菌 A4 感染冬凌草叶片，采用 L9 （3 ）正交设计法优化冬凌草的 毛状根诱导条件。结果表明：叶片最佳预培养时间为 4 天，发根农杆菌浸染叶片的 最佳时间为 20min ，最佳共培养时间 1d。 3.利用 4 种不同剂量离子束对冬凌草种子进行辐照，对其发芽率、发芽势和由其 长成的组培苗苗高，叶片数和叶片面积进行统计分析，得出：经过处理的种子发芽 势比没有经过处理的种子发芽势低，而处理过的种子发芽率比未经处理的都要高。 16 + 2 另外，处理剂量为 1×10 N /cm 时种子的发芽势和发芽率都较其他剂量高，其发芽 + 势和发芽率随注入剂量的增加先降低，随后又有升高，呈“马鞍型”；不同剂量 N 注 入的冬凌草种子在无菌条件下生长成的组培苗，株高、叶片数和叶面积随着处理剂 量的增加呈现先升后降的变化。同时，运用超声提取法，将冬凌草组培苗中的冬凌 草甲素提取后分析，得出，不同剂量离子束处理的冬凌草种子无菌条件下生长成的 - 2 - 摘要 组培苗，其所含的冬凌草甲素含量也随剂量的增加而出现升-降-升的特点，当处理 15 + 2 剂量为 4×10 N /cm 时冬凌草组培苗中的冬凌草甲素含量达到最高值。但是总体上 看经过离子束处理种子长成的组培苗中冬凌草甲素含量比未经处理的对照组含量都 要高。 关键词：冬凌草，组织培养，毛状根，离子束辐照，冬凌草甲素 - 3 - Abstract Abstract Rabdosia Rubescens(Hcnsi)Hara,belonging to Labiatae,Rabdosia,is a kind