内皮祖细胞对神经干细胞增殖分化及Notch信号分子表达的影响.pdf

摘要 摘要 目的和意义： 缺血性脑血管疾病已成为人类致死致残的最主要的原因之一，它主要 包括两大病理损害，即局部血循环结构的缺失和神经元的损失。故而血供的 再恢复及神经修复是缺血性脑损伤临床治疗的两个关键环节。 传统观念认为，成年哺乳动物中枢神经系统不可能再生，如果出现神 经元丢失或缺损则难以修复，神经功能的重建被视为几乎不可能。但上世纪 stem 90年代，神经新生与神经干细胞(neural cells，NSCs)的发现改变了 脑损害后神经不可修复的传统观念。近年亦发现，各种脑损害如脑缺血、癫 痫和脑创伤等能产生各种可溶性细胞损伤信号激活NSCs，通过神经新生，选 择性补充脑皮层神经元与神经胶质的丢失。有关NSCs的增殖及分化的调控 机制随之成为神经科学的研究热点。现已知NSCs的增殖与分化的作用机制 复杂而多样，其中Notch信号通路是调节细胞增殖分化的一条古老的途径， 在神经发生过程中，它决定着NSCs是选择继续增殖还是向神经元分化，并 与NSCs分化为神经元与胶质细胞的比例密切相关。 随着血管内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPcs)参与体 内血管新生理论的建立，利用内源性EPCs或移植EPCs促进脑缺血区域血管 重建也开始受到关注。研究发现缺血性脑损伤发生时，EPCs可从骨髓动员 释放到外周血循环或经人为移植到体内，这些细胞迁移到缺血部位参与缺血 组织的血管重建和损伤血管的再内皮化过程，使缺血区域中毛细血管密度上 调，脑梗死面积缩小，神经功能改善。值得重视的是，神经发生与脑血管发 生具有密切关系，血供的恢复是神经修复的基础，EPCs不仅参与血供的恢 复，而且还可促进内源性NSCs迁入缺血脑组织参与修复，提示EPCs移植或 体作用及影响还不尽了解。因此我们应用体外的共培养模型，研究在不同的 联合移植治疗缺血性脑损伤等中枢神经系统疾病奠定理论基础。 研究内容和方法： Ⅱ 摘要 1．贴壁筛选法分离培养大鼠EPCs，形态学、免疫细胞染色法检测Vlll CDl33、Tie一2、CD34的基因表达鉴定EPCs。 2．神经球悬浮法培养小鼠NSCs，免疫细胞染色法检测nestin的表达 以鉴定NSCs。 NSCs共培养组[EPCs+(DAPT+NSCs)]：transwel1上层皿为EPCs，下层皿 (DAPT+NSCs)：transwell上层皿为混合培养培养基，下层皿为已经DAPT 皿为混合培养培养基，下层皿为NSCs。 的基因表达的变化。 结果： 1．EFCs呈典型的“鹅卵石一排列生长，并经细胞化学染色结果显示Vlll FLK—l、CDl33和Tie-2的基因表达，符合EPCs特征。 2．成球悬浮法培养的小鼠NSCs增殖旺盛，nestin呈阳性表达。 3．各共培养组NSCs增殖分化相关基因及notch信号通路相关基因的变 化： 因子有关。 Ⅲ 摘要 明EPCs可以促进NSCs向神经元方向转化，并与Notch信号通路的调节及内 皮生长因子有关。 较其他组表达下调，而mashl基因表达上调。 结论： EPCs可以促进NSCs的增殖及其向神经元方向的分化，这种作用与EPCs 相关。 关键词：内皮祖细胞；神经干细胞；神经元； notch信号 IV ABSTRACT objeetive： Ischemic cerebrovasculardiseasehasbecomeoneofthemainreasonsfor deathandMutilationin consistsoftwomain causing humanbeing．It pa