HSV-2多表位DNA疫苗的构建和人rab26的克隆表达与定位研究.pdf

中文摘要 疫效果，通过观察一系列体液免疫和细胞免疫指标以便进一步研究DNA疫苗的免 疫机制。以往HSV-2DNA疫苗的构建主要集中于病毒免疫原形最强的糖蛋白D 区段，实践表明它并不是最有效的。我们综合考虑到病毒入侵和复制整个生理过 程，构建了gB、gc、gD和即刻早期蛋白ICP27多表位复合疫苗，此外还此基础 上对其进一步修饰，分别在DNA复合疫苗上引入信号肽基因和泛素基因，以期能 有效防止HSV-2的感染。另一方面为了提高免疫活性和保护能力，我们尝试着将 复合疫苗质粒与佐剂IL2质粒通过一定比例的阳离子脂质体包裹共表达于小鼠体 内免疫。我们通过与阴性对照组比较检测到了高效价的特异性lgG抗体，高水平 的特异性T淋巴细胞杀伤率和增殖率以及高浓度的细胞因子IL2，IFN-1量。这些 结果可以初步得出我们成功构建出HSV-2 DNA疫苗并能有效引起小鼠特异性的 免疫应答。 以完整EST为参考序列设计引物，以人的胎脑cDNA为模板，用PCR方法 筛选获得tab26基因全长序列，并驱克隆到克隆载体pGEM．T，真核表达载体 细胞株中表达量有明显的差异。把tab26基因转染入HeLa细胞中，通过与绿色荧 光蛋fa(GFP)基因融合表达，显示Rab26定位于胞内膜性细胞器上。在大肠杆菌 表达系统获得rab26基因的高表达。这些结果为rab26基因对细胞内蛋白内吞和运 输功能的进一步研究打下了基础。 关键词：病毒单纯疱疹2型；DNA疫苗；白细胞介素2；脂质体；Rab26 Abstract humoralandcell-mediatedandmakethe In to the order immunity investigate the ofDNA constructed foundationfor theimmunemechanismvaccine,we studying DNAvaccinein vaccineand theimmune induced HSV-2DNA studyed response by ofacocktailcdHSV-2 andthe mice．Theeffectiveness B，CD three-垂ycoproteingene immediate ICP27 vaccinein to individual earlyprotein gene comparisononly D vaccinewas with to theHSV-2 studied gene regardprotectingagainst glycoprotein weadded and tothe infection．Furthermore signalpeptidegene ubiqutingene DNAvaccine theother