利用cDNA-AFLP分析铜胁迫下紫鸭跖草基因差异表达.pdf

中：之援要 洲Ill II[[I Y191 中文摘要 铜是植物正常生命活动所必需的微量矿物元素，但是适宜植物生长的铜离子 浓度范围较小，从分子生物学的角度研究植物的耐铜机理对于解决铜污染问题具 有积极的意义。本文采用了具有铜离子富集能力的植物紫鸭跖草(Setcreasea purpurea 子胁迫下紫鸭趾草基因的差异表达。 以终浓度为10001Jmol／L的铜离子胁迫下培养的紫鸭跖草为研究对象。通过 Trizol改良法提取根部总RNA。经由反转录、双链cDNA扩增、酶切及连接、 预扩、选扩、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，共获得90个差异表达片段。再经过 切胶、PCR扩增后筛选出17个差异片段的扩增产物，最后纯化测序得到6个差 异片段的序列。通过NCBI上的BLASTX数据库进行比对，结果显示6条差异 表达片段可能在铜离子对紫鸭趾草的胁迫中产生作用。其中编号为E5MG．3的差 65％。由此可推测差异表达的基因功能涉及到细胞信号的传导、细胞质的抗氧化、 细胞的新陈代谢、蛋白质修饰等多个方面。 关键词：紫鸭跖草；cDNA．AFLP；变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；银染技术 Abstract isalltracemineralelement of Copper essentialfor concentration plantlife．，which suitablefor is low．Itisof in molecular plantgrowthvery greatsignificancestudying mechanismof resistanceof this copper plant．Inpaper,thegenes differentially in SetcreaseaBoomwereisolatedand expressedcopper-resistant identified Purpurea themethodof with by cDNA-AFLPthesilver together staining． Setcreasea Boomcultivatedintheenvironment、析ml Purpurea 0009mol／L asfinalconcentrationwas thetotalamount copper regarded嬲researchobject．Extract ofRNAfromroots Trizolmethod．Atotalof90 throughimproved differentially bandsCanbe reverse eDNA expressed