背侧纹状体αCaMKII下调对小鼠相关学习能力及突触可塑性的影响.pdfVIP

2014 华东师范大学硕士论文 论 文 摘 要 论 文 摘 要 Alpha 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II （alpha calcium/calmodulin-dependent protein kinase II, αCaMKII ）是一种重要的多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，已有 大量研究表明其在海马相关学习记忆和突触可塑性中发挥重要的作用。纹状体作 为大脑中一个重要脑区，参与运动技巧性学习、刺激—反应联合性学习等功能的 调节, 并且富含αCaMKII 。因此,了解αCaMKII 在纹状体中的作用及机制对于揭 示纹状体相关运动认知障碍性疾病的发病机理、寻找治疗方法有着十分重要的意 义。然而到目前为止，有关αCaMKII 在纹状体脑区相关学习任务中的作用及机 制尚未完全阐明。 本研究采用 RNA 干扰技术特异性抑制小鼠背侧纹状体脑区 αCaMKII 的表 达，通过分子生物学、离体电生理学和整体行为学技术，从分子、细胞和整体不 同层次，系统研究纹状体脑区αCaMKII 在纹状体相关行为学中的作用及机制。 主要结果如下： 1. αCaMKII shRNA 小鼠的构建及鉴定 本课题采用注射慢病毒包装的小分子RNA 干扰技术，构建了背侧纹状体脑 区αCaMKII 特异性下调的小鼠。Western blotting 结果显示，αCaMKII-shRNA 小 鼠纹状体中αCaMKII 表达量仅为对照组WT-GFP 小鼠的13%。 2. 纹状体αCaMKII 下调损害小鼠纹状体相关的学习能力 加速模式转棒和水十字迷宫行为学任务结果表明，下调纹状体 αCaMKII 显 著降低小鼠运动技巧学习和刺激—反应 （stimulation- response ）学习能力。并采 用open field、pole test 、stepping test 和wire suspension 等行为学实验，排除了纹 状体 αCaMKII 的下调通过影响基本运动能力、协调性及肌肉力量而损害运动技 巧学习的可能性。 3. 纹状体 αCaMKII 下调不影响背侧纹状体中央多棘神经元（Medium Spiny Neurons, MSNs ）电生理特性和突触前递质释放，但显著降低小鼠背侧纹状 体脑区的突触传递及长时程增强 I 2014 华东师范大学硕士论文 论 文 摘 要 电生理实验结果表明，αCaMKII 下调对背侧纹状体MSNs 的基本电生理特 征（包括静息膜电位、膜电阻、放电特征和电流电压曲线）及双脉冲抑制（反映 突触前递质释放的参数）没有显著影响；但显著减弱了皮层-背侧纹状体通路的 基本突触传递以及长时程增强（Long term potentiation, LTP ）的幅度。 4. 纹状体αCaMKII 下调降低突触后膜谷氨酸受体表达及功能 突触后膜上的离子型谷氨酸受体主要包括α-氨基-3-羟基-5- 甲基-4-异恶唑丙 酸受体（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor ，AMPAR ） 和 N- 甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor ， NMDAR ）。 Western blotting 结果显示，下调αCaMKII 对纹状体突触后膜上AMPAR 含量无 影响，但能显著降低AMPAR 磷酸化水平及NMDAR 的含量。与western blotting 结果相一致，离体脑片膜片钳实验结果显示，αCaMKII 的下调显著降低了背侧 纹状体MSNs AMPAR 和NMDAR 介导的电流。 5. 纹状体αCaMKII 下调能降低纹状体多巴胺浓度 高效液相色谱质谱联用的 （LC-MS/MS ）方法测定结果显示，在纹状体中下 调αCaMKII 能显著降低多巴胺含量。 综合以上实验结果表明，下调αCaMKII 能显著