以聚乙烯亚胺为骨架的非病毒基因载体的构建及其转染大鼠肝细胞的研究.pdfVIP

老年医学与保健2012年第 18卷第 1期GeriatrHealthCare，2012，Vo1．18．No．1 以聚乙烯亚胺为骨架的非病毒基因载体 的构建及其转染大 鼠肝细胞的研究 王玉强 盛 净 袁丽粉 吕 楠 段诗悦 苏 靖 金 拓 陆 平 摘【要】目的 构建交联聚乙烯亚胺 (Polyethylenemine，PEI)衍生物PEIB·u，研究其对大鼠肝细胞系BRL一3A的 细胞毒性和转染效率。方法 以PEI800Da为骨架，1,4一丁二醇二氯甲酸酯为连接剂制备聚合物PEI-Bu，用凝胶渗透 色谱法 (GPC)测定分子量 ，动态光散射法 (DLS)测定PEI-Bu／pDNA复合物的粒径和Zeta电位，琼脂糖凝胶电泳 考察其复合质粒 DNA 的能力，MTT法检测 PEI-Bu对 BRL一3A的细胞毒性，以荧光素酶质粒作为报告基因，测定 PEI．Bu／pDNA复合物在BRL一3A细胞中的转染效率。结果GPC测定分子量为Mw4289Da，多分散指数 1．31，复合物 的粒径为 138—161nm，Zeta电位为2．4—4．3mV，凝胶电泳表明在质量比大于 1时PEI-Bu具有复合 DNA的能力，在同 一 浓度下PEI-Bu的细胞的毒性小于PEI25kDa 0．01)，PEI-Bup／DNA在质量比为5时达到最高转染效率，高于 PEI25kDa 0．01)，并与Lipofectamine2000相当 (P0．05o结论PEI-Bu对BRL一3A细胞是一种低细胞毒性、高 转染效率的非病毒基因载体，在肝细胞基因治疗领域中具有潜在的应用前景。 关【键词】聚乙烯亚胺；非病毒基因载体；BRL一3A；细胞毒性；转染效率 【中图分类号】R978 文【献标识码】A 文【章编号】1008-8296(2012)0·1-04305 DOI：10．3969~．issn．1008—8296．2012—01-14 Cou~tructionofnon-viralgenecarrierbasedonpolyethylenemineanditstransfectioninratlivercells WANGYu。 qiang．SHENGJing,YUANLi_jn．1JvNcm，DUANShi-yue,SUJing．J1NTuo,LUPing．DepartmentofGeriatrics, ShanghaiNinthPeoplesHospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200011，China Correspondingauthor：LUPing．E—mail：luping．shanghai@ 163．com． A【bstractl0hjectiveTosynthesizecross—linkedPolyeth)leniminederivativePEI·Buandinvestigateitscytotoxicity andtransfectioneffliciencyinratlivereelllineBRL一3A。M ethodsPEI—B11wassynthesizedbyusing阿 8ooDaasabackbone and1．4。DibutnaediolChloroformatewasusedasalinker．Themolecularweightofthepolymerwasmeasuredbygelper— meationchromatography (GPC)．Theparticlesizeandzetapotentialofcomplexesweremeasuredbydynamiclightscattering (DLS)．ThepDNAcondensationabilityofthepolymetwasevaluatedbyagarosegelelectrophoresis．MTTassaywasem— ployedtomeasurethecytotoxicityofthepolymer．Luciferaseplasmidwasusedasthereportergenetoinvestigatethetrnas— fectionefficiencyinBRL-3Acells．Re