实验一动物蠕虫学粪便检查技术(一).doc

实验一 动物蠕虫学粪便检查技术(一) 一、实验目的及要求 1．掌握动物蠕虫学常见的实验室粪便虫卵检查技术。 2．在光学显微镜下区分虫卵和异物。 3．认识吸虫卵、绦虫卵、线虫卵等蠕虫虫卵，掌握其一般特征。 二、实验器材 载玻片，盖玻片，镊子，平皿，烧杯，塑料杯或纸杯，漏斗，漏斗架，胶帽吸管，离心管，试管，玻璃棒，粪筛，纱布，平底管（青霉素小瓶），玻璃珠，三角小烧瓶，100ml球状烧瓶，火柴棍，特制铁丝圈，虫卵计数板，普通离心机，光学显微镜等。 甘油，饱和食盐水，0.1N（或4%）NaOH，家畜新鲜粪便等。 三、实验方法、步骤和操作要领(直接涂片法、漂浮法、沉淀法、虫卵计数法) （一）直接涂片法（Examination of Direct Smears） 在清洁的载玻片上滴1-2滴水或1滴甘油与水的等量混合液（加甘油的好处是能使标本清晰，并防止过快蒸发变干），其上加少量粪便，用火柴棍仔细混匀。再用镊子去掉大的草棍和渣子等，之后加盖玻片，置光学显微镜下观察虫卵或幼虫。(图1-1) 另一方法是直接涂片法的改良法叫回旋法。取2～3g粪样加清水2～3倍，充分混匀成悬液。后用玻璃棒搅拌0.5—1min，使之成回旋运动，在搅拌过程中迅速提起玻璃棒，将棒端附着的液体放于载片上涂开，加上盖片在镜下检查。检查时多取几滴悬液。该方法的原理是由于回旋搅动的结果，可使玻璃棒端悬液小滴中附有较多量的寄生虫卵或幼虫。 （二）漂浮法（Method Involving Flotation） 其原理是采用比重高于虫卵的漂浮液，使粪便中的虫卵与粪便渣子分开而浮于液体表面，然后进行检查。漂浮液通常多采用饱和盐水，其方法简便、经济、易行。饱和盐水漂浮法对大多数线虫卵、绦虫卵及某些原虫卵囊均有效，但对吸虫卵、后圆线虫卵和棘头虫卵效果较差。 饱和盐水漂浮方法操作步骤：取新鲜粪便2g放在平皿或烧杯中，用镊子或玻璃棒压碎，加入10倍量的饱和盐水，搅拌混合，用粪筛或纱布过滤到平底管中，使管内粪汁平于管口并稍隆起为好，但不要溢出。静置30分钟左右，用盖片蘸取后，放于载片上，镜下观察；或用载片蘸取液面后翻转，加盖片后镜检；也可用特制的铁丝圈进行蘸取检查。(图1-2) 除上述漂浮方法外，还有一种简单的漂浮技术．它可以检查含卵量少的粪便（每g粪便少于50个虫卵）。具体步骤如下：即取3g粪便放于一塑料杯或烧杯内，加进50ml漂浮液后．用玻璃棒搅匀，通过粪筛或双层纱布过滤到另一个杯中．漂浮10分钟．然后用一试管插在滤液的中央底部，并迅速提起。把附在上面的液滴滴落在载片上，加上盖片镜检。 （三）沉淀法（Sedimentation Technique） 其原理是利用虫卵比重比水大的特点，让虫卵在重力的作用下，自然沉于容器底部，然后进行检查。沉淀法可分为离心沉淀法和自然沉淀法两种。 1．离心沉淀法。通常采用普通离心机进行离心，使虫卵加速集中沉淀在离心管底，然后镜检沉淀物。方法是取5g被检粪便，置于平皿或烧杯中，加5倍量的清水，搅拌均匀。经粪筛和漏斗过滤到离心管中。置离心机上离心2-3分钟（电动离心机转速约为500转/分），然后倾去管内上层液体，再加清水搅匀，再离心。这样反复进行2-3次，直至上清液清亮为止，最后倾去大部分上清液，留约为沉淀物1/2的溶液量，用胶帽吸管吹吸均匀后，吸取适量粪汁（2滴左右）置载玻片上，加盖玻片镜检。 2．自然沉淀法。操作方法与离心沉淀法类似，只不过是将离心沉淀改为自然沉淀过程。沉淀容器可用大的试管进行。每次沉淀时间约为半小时左右。自然沉淀法缺点是所需时间较长，但其优点是不需要离心机，因而在基层乡下操作较为方便。 （四）虫卵计数法（Egg Counting Method） 虫卵计数法主要用于了解畜禽感染寄生虫的强度及判断驱虫的效果。方法有多种，这里介绍二种常用的计数方法。 1．麦克马斯特氏法（McMasters Method）。 计数板的构造：计数板是由二片载玻片组成，其中一片较另一片窄一些（便于加液）。在较窄的玻片上有1cm见方的刻度区二个，每个正方形刻度区中又平分为5个长方格。另有厚度为1.5mm的几个玻璃条垫于二个载玻片之间，以树脂胶粘合。这样就形成了二个计数室，每个计数室的容积为0.15ml（0.15cm3）。(图1-3) 计数方法：取2g粪便混匀，放入装有玻璃珠的小瓶内，加入饱和盐水58ml充分振荡混合，通过细的粪筛过滤，后将滤液边摇晃边用吸管吸出少量滴入计数室内，置于显微镜台上，静置几分钟后，用低倍镜将二个计数室内见到的虫卵全部数完，取平均值，再乘以200，即为每克粪便中的虫卵数（EPG）。  2．斯陶尔氏法（Stolls Method）。用小的特制球状烧瓶，在瓶的下颈部有二个刻度，下面为56ml，上面为60ml（没有这种球