实验九DNA的重组与鉴定.pptVIP

实验九 DNA的重组与鉴定 一.实验目的 二、实验原理 实验原理 　 　 重组DNA技术基本原理：切、接、转、筛 　　 三、实验仪器 四、材料及试剂 四、材料及试剂 试剂 五、实验步骤 实验步骤 转化及筛选 实验结果 实验报告 恒温空气摇床 恒温培养箱 培养皿 恒温水浴锅 E.coli DH5α pUC19 or T载体 λDNA 1. T4DNA连接酶 2． 10×T4DNA连接酶缓冲液: 400mmol/L Tris-Cl pH7.5 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT, 500 μg/ml BSA 5-10mmol/L ATP 灭菌去离子水 Kac ( 3mol/L，pH5.2) Xgal (20mg/ml) IPTG (200mg/ml) 1. 混合以下溶液于一个无菌离心管中 xμl pUC19 质粒 (0.1-4μg) 2μl 10×酶切缓冲液 1－5U 限制性内切酶（EcoRI） yμl 去离子水 终体积为 20μl 2.在推荐温度下育温1小时（一般