洋桔梗叶片再生体系的建立及农杆菌介导的NPR1基因转化洋桔梗的初步研究.pdf

致 谢 本论文是在导师周根余教授的悉心指导下完成的。论文从选题、 设计、实施到论文的撰写，每一步都凝结着周老师的心血和汗水。 感谢周老师三年以来在学业上的悉心指导和生活上的关心照顾。周 老师严谨的治学态度，兢兢业业的工作精神以及缜密的科学思维将 使我受用终生，在此向周老师致以崇高的敬意和衷心的感谢! 同时，感谢复旦大学沈大棱教授、倪德祥教授、中国科学院植 物生理生态研究所何祖华研究员、上海师范大学杨仲南教授、李建 粤老师在实验中提供的无私的帮助和指导，没有他们的帮助，很难 相信我的论文能完成的这么顺利!老师们博大精深的知识、严谨求 实的科学态度、开拓创新的进取精神使我受益非浅! 感谢所有同学、师弟、师妹们在实验和生活中的帮助!本实验 还得到了中科院植物所的段可，生理所的李刚、刘彦涛，生物工程 中心的孙桐国等同学在实验上的帮助，在此也对他们表示感谢! 感谢我的家人和朋友对我多年来在学业和生活上的支持和帮 r ， 助! 感谢所有关心和帮助过我的人! 摘 要 通过正交等实验对洋桔梗品种LisaBlue叶片再生体系进行了系统的研究。 O．5mg／L+NAA 结果表明：洋桔梗叶片不定芽诱导最适培养基为MS+ZT m01．ITI2．s一；不定芽诱导生根最适培 0．01mg／L，培养基pH值6．3，光照强度60u 养基为1／4MS+IBA lmg／L，糖浓度509／L，琼脂浓度49／L，不添加活性炭。 通过洋桔梗抗生素敏感性实验，确定了洋桔梗转化不定芽筛选抗生素(潮 m∥L的头孢霉素。 霉素，Hyg)浓度为50mg／L；抑菌抗生素采用浓度为250 以洋桔梗叶盘为外植体，通过根瘤农杆菌菌株EHAl05介导，用构建于质 1301的NPRl基因转化洋桔梗。实验结果表明：叶片预培养2d，农 粒pCambia 杆菌浸染20min，与农杆菌共培养2d时，筛选培养基上洋桔梗叶盘不定芽分化 频率最高，达13．3％。 随机选取4株移栽成活的具有Hyg抗性的洋桔梗植株进行GUS染色和PCR 分子检测，均为阳性，’初步证明外源NPRl基因已整合到洋桔梗基因组中。 关键词：洋桔梗、NPRl基因、叶片再生体系、遗传转化 Abstract onthe of the research system systematic onhogonalexperiments，a Through wascarriedout．Theresults russellianum theleafofEustoma bud from regenration differentionwasMS+ZT forthebud the culturemidium that indicated optimal valueofmediumwas ofillumination